摘要： ［ 目的］ 研究肉苁蓉茶对小鼠抗疲劳和耐缺氧能力的影响。［ 方法］ 分别以3 333、1 667、833 mg ／ kgBW剂量（以茶颗粒干品计） 的肉苁蓉茶提取液， 给小鼠连续灌胃35 d， 通过负重游泳试验、尿素氮和肝糖原测定评价其抗疲劳功能， 通过常压耐缺氧试验、亚硝酸钠中毒试验和急性脑缺血（断头） 试验评价其耐缺氧功能。［ 结果］ 在本实验条件下， 肉苁蓉茶能够延长小鼠的负重游泳时间， 增加小鼠的肝糖原的储备量， 减小小鼠运动后的血乳酸量， 对疲劳小鼠的血清尿素氮无明显影响； 肉苁蓉茶能够延长小鼠在常压下缺氧存活时间及硝酸钠中毒后的存活时间， 对急性脑缺血（断头） 后张口喘气时间无明显影响。［ 结论］ 肉苁蓉茶可以提高小鼠的抗疲劳能力和常压耐缺氧能力。

关键词： 肉苁蓉茶； 抗疲劳； 耐缺氧； 小鼠

中国有2000 多年的茶文化， 很多人有喝茶的习惯， 即使苦如苦丁茶， 也都有很多人喜欢长饮。喝茶不但可以修身养德， 还能提神醒脑， 裨益身心。随着社会的发展， 人们对茶的保健要求也越来越高。传统茶叶以茶科植物叶作为原料， 其功效面较窄且有限， 中国是中草药资源大国， 把具有保健功效的中药材开发成茶饮， 开始逐渐成为茶行业的研究热点。肉苁蓉茶提取自植物肉苁蓉， 肉苁蓉（Herba Cistanche）是列当科（Orobanchaceae） 肉苁蓉属（Cistanche） 植物肉苁蓉的干燥带鳞叶的肉质茎， 主产于我国内蒙古、新疆、甘肃和宁夏等地， 有补肾阳、益精血、润肠通便的功效， 常用于治疗阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力及肠燥便秘等［1］。本试验对肉苁蓉茶的抗疲劳及耐缺氧功能进行了研究， 为其开发为保健饮料或茶品提供理论和实验依据。

1 材料和方法

1.1 样品及处理

由内蒙古某公司提供的肉苁蓉茶颗粒， 规格： 5 g ／ 袋， 人口服推荐用量为每人（成人） 每日2 次， 每次1 袋， 成人体重按60 kg 计算， 折合剂量为166.67 mg ／ kg BW。称取1 666.7 g样品， 加入10 倍量的80℃热水浸泡30 min， 过滤取滤液； 再以同样方法对滤渣浸泡提取1 次， 合并两次滤液， 置旋转蒸发仪中减压浓缩至1 000 ml， 即得1 666.7 mg ／ ml 浓度样品提取液（以干品计， 下同） 供试验用。

1.2 实验动物及环境条件

选用广东省医学实验动物中心繁殖的SPF 健康成年NIH种雄性小鼠336 只， 体重为18～22 g， 实验动物生产许可证号：NO.0047015。实验动物室温度： 22℃～25℃， 相对湿度： 55%～70%。实验动物使用许可证号： SYXK 桂2007-0003。

1.3 主要仪器与试剂

仪器： 动物天平、分析天平、离心机、旋转蒸发仪、高速分散器、振荡器、恒温水浴锅、721 分光光度计、半自动生化分析仪、游泳箱（50 cm × 50 cm × 40 cm）、秒表等。试剂： 蒽酮、硫脲、浓硫酸、三氯乙酸、葡萄糖、氟化钠、硫酸铜、钨酸钠、对羟基联苯、乳酸锂（均为分析纯）、BUN 试剂盒（购自北京中生北控生物科技公司）、钠石灰、亚硝酸钠、凡士林等。

1.4 抗疲劳功能实验方法

1.4.1 负重游泳试验根据人口服推荐用量， 设3333、1667、833 mg ／ kgBW （分别相当于人体推荐用量的20、10、5 倍） 3个剂量组和1 个阴性对照组， 每组12 只动物。分别量取1 666.7 mg ／ ml 浓度的样品提取液20、10、5 ml， 各加蒸馏水水至200 ml， 配成166.67、83.33、41.67 mg ／ ml 浓度溶液， 以0.2 ml ／ 10 gBW 的体积分别给予相应剂量组动物灌胃对照组予以等体积的蒸馏水， 每天灌胃1 次， 连续35 d。末次给样30 min 后， 给小鼠尾根部负荷5%体重的铅皮，置水温25℃泳槽中游泳， 以小鼠开始游泳至死亡的时间作为负重游泳时间。若实验组游泳时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠负重游泳时间的作用。

1.4.2 血清尿素氮测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后， 将小鼠置30℃水中不负重游泳90min。游泳完休息60 min 后拔眼球采血， 测定血清尿素氮值。若实验组血清尿素氮含量明显低于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有减少疲劳小鼠尿素氮产生的作用。

1.4.3 肝糖原测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后处死小鼠， 称取0.1 g 肝脏， 加入5%三氯乙酸匀浆、离心， 取上清液测定肝糖原含量（蒽酮法）。若实验组肝糖原含量明显高于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有促进小鼠肝糖原储备的作用。

1.4.4 血乳酸测定动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样30 min 后， 将小鼠置30℃水中不负重游泳10min， 分别在游泳前、游泳后0 min、游泳后休息20 min 采血进行乳酸测定。血乳酸曲线下面积用下式计算：血乳酸曲线下面积＝5× （游泳前血乳酸值＋3×游泳后0 min的血乳酸值＋2×游泳后休息20 min 的血乳酸值）若实验组血乳酸曲线下面积低于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有减轻小鼠运动后血乳酸

堆积的作用。

1.5 耐缺氧功能实验方法

1.5.1 常压耐缺氧实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 将各组小鼠放入盛有5 g 钠石灰的250ml 磨口瓶内（每瓶1 只）， 用瓶塞和凡士林密封瓶口， 记录小鼠因缺氧而死亡的时间。若实验组小鼠的存活时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠常压下缺氧存活时间的作用。

1.5.2 亚硝酸钠中毒存活实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 给各组小鼠按240 mg ／ kgBW 剂量腹腔注射亚硝酸钠（注射量为0.1 ml ／ 10 g BW）， 注射完毕立即计时， 记录小鼠中毒后存活的时间。若实验组小鼠的存活时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间的作用。

1.5.3 急性脑缺血性缺氧实验动物分组及给样品方法同1.4.1 项。末次给样1 h 后， 各组动物逐只自颈部快速断头， 记录小鼠自断头至张口喘气停止的时间。若实验组小鼠的喘气时间明显长于阴性对照组， 且差异有统计学意义（P﹤0.05）， 则判定该样品有延长小鼠断头后喘气时间的作用。

1.6 实验数据统计应用SPSS13.0 统计软件中ANOVA 模块对试验数据进行单因素方差分析， 用Dunnett 模块进行试验数据的组间比较。

2 结果

2.1 一般情况

各组小鼠的生长状况良好， 生理体征、外观、行为、大小便、皮毛等均未见异常。

2.2 抗疲劳试验指标

样品各剂量组小鼠的负重游泳时间均比阴性对照组长（F= 6.115， P = 0.002）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01）， 表明该样品能延长小鼠的负重游泳时间。各剂量组小鼠的肝糖原含量均高于阴性对照组（F =4.910， P = 0.006）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能促进小鼠的肝糖原储备。各剂量组小鼠不负重游泳过程中的血乳酸曲线下面积均小于阴性对照组（F = 3.551， P = 0.024）， 其中高、中剂量组与阴性对照组的差异有统计学意义（P﹤0.05）， 表明该样品能减少小鼠运动后的血乳酸堆积。各剂量组小鼠的血清尿素氮含量与对照组相近， 其差异无统计学意义（F = 0.509， P =0.679）， 故尚不能认为该样品能减少疲劳小鼠体内尿素的含量。结果见表1。

2.3 耐缺氧试验指标

样品各剂量组小鼠缺氧而死亡时间均大于阴性对照组（F= 4.457， P = 0.008）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能够延长小鼠缺氧状态下的存活时间。各剂量组小鼠亚硝酸钠中毒后存活时间均大于阴性对照组（F = 11.803， P﹤0.001）， 其中高、中剂量组与对照组的差异有统计学意义（P﹤0.01 和P﹤0.05）， 表明该样品能够延长小鼠亚硝酸钠中毒后的存活时间。各剂量组小鼠断头后喘气时间比阴性对照组有所延长， 但其差异无统计学意义（F = 1.309， P = 0.284）， 故尚不能判定该样品具有延长小鼠在急性脑缺血性缺氧（断头） 后张口喘气时间的作用。结果见表2。

3 讨论

现代社会大约有70%的人处于亚健康状态， 而导致亚健康状态的最大“亚病因”， 就是疲劳。已经有学者提出， 疲劳是当今社会最大的公共卫生问题。中国有喝茶养生的传统， 无论是在工作还是休息， 都有很多人喜欢茶， 因此， 开发具有抗疲劳功能的保健茶饮具有积极的意义。肉苁蓉在中国有两千年的使用历史， 在历代增力中药处方中出现率占首位［2］。据《本草纲目》记载， 肉苁蓉“补而不峻， 故有从容之号。” 现代药理学研究揭示， 肉苁蓉的功效成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木质素类、多糖和生物碱等， 可以改善细胞内线粒体能量代谢， 增强ATP 酶活性， 增加血红蛋白含量， 促进糖原合成，减少乳酸产生［3～5］， 从而增强体力， 缓解疲劳。肉苁蓉茶系由植物肉苁蓉加工提取制成， 保留了肉苁蓉的部分功效成分， 本实验对肉苁蓉茶提高抗疲劳和耐缺氧能力的作用进行了研究。运动耐力的提高是机体抗疲劳能力加强的直接表现， 能量储备充足是耐力增强的内因。肌肉中的三磷酸腺苷只能提供几十秒的运动需要， 在氧充足条件下， 糖原是机体最先动用的能源物质， 其次是蛋白质和脂肪。乳酸是糖无氧酵解的产物， 是导致机体疲劳感的直接因子。本研究结果显示， 肉苁蓉茶可以提高小鼠的运动耐力（负重游泳）， 增加小鼠的肝糖原储备，减少小鼠运动后体内乳酸堆积。长时间运动后， 体内糖原消耗殆尽， 此时如果要保持运动， 机体就开始动用蛋白质为供能物质， 蛋白质分解供能后生成尿素， 所以疲劳过度时血液尿素氮含量上升。在本研究中， 各组小鼠运动后血清尿素氮值接近，实验组与对照组的差异无统计学意义， 这可能是因为游泳90min 后， 实验组和对照组小鼠的糖原都已耗尽， 机体动用了大量蛋白质用以供能。综合各项试验结果， 依据《保健食品检验与评价技术规范》， 可判定肉苁蓉茶具有提高小鼠抗疲劳功能的作用。耐缺氧能力是间接反映抗疲劳能力的一组指标， 因为疲劳的过程中， 往往伴随着组织缺氧， 如果机体携氧、利用氧的能力强， 就能产生更多的能量， 同时减少无氧酵解产生的乳酸，延缓疲劳的出现。在本研究结果显示， 肉苁蓉茶可以延长小鼠在缺氧状态下的存活时间和亚硝酸钠中毒后的存活时间， 说明该样品可以增强小鼠机体携氧和利用氧的能力。在急性脑缺血缺氧（断头） 试验中， 由于供血终止， 脑组织只能利用自身存储的能量和氧气短暂的维持功能， 表现为张嘴喘气。由于脑组织内能量和氧气储备非常有限， 所以只有降低脑的氧耗， 才能维持更长时间的喘气， 在本研究中， 受试组小鼠的张嘴喘气时间表现出延长的趋势， 但是与对照组的差异无统计学意义， 提示肉苁蓉茶降低脑氧耗的作用不明显， 受试组小鼠喘气时间的延长趋势， 更主要的原因可能是脑内能量和氧气的储备利用高于对照组。综合各项试验结果， 依据《保健食品检验与评价技术规范》， 可判定肉苁蓉茶具有提高小鼠耐缺氧能力的作用。本研究结果表明肉苁蓉茶可以提高小鼠的抗疲劳和耐缺氧能力， 为肉苁蓉从药品走向保健品市场提供了实验依据， 随着肉苁蓉人工栽培的实现， 肉苁蓉茶在职业疲劳人群和老年人群中必将有广阔的市场前景。

参考文献：

［ 1 ］ 赵新杰， 夏华玲， 王苏静. 肉苁蓉的药理作用研究进展［J］. 中国药业， 2009 （18）： 17， 77-78.

［ 2 ］ 孙建， 罗慧英. 肉苁蓉水煎剂对运动小鼠抗疲劳能力的影响［J］.甘肃中医学院学报， 2009， 26 （4）： 10-12.

［ 3 ］ 徐辉， 魏晓东， 张鹏霞， 等. 肉苁蓉多糖对衰老大鼠肝线粒体保护作用的研究［J］. 中国老年学杂志， 2008， 28 （9）： 866-867.

［ 4 ］ 杨宏新， 杨勇， 闫晓红. 肉苁蓉抗运动性疲劳机制的实验研究［J］. 中国中医药信息杂志， 2008， 15 （4）： 24-26.

［ 5 ］ 吴晓春， 史颖. 肉苁蓉的研究与临床应用［J］. 甘肃中医，2007， 2 （12）： 49-51.