1 材料与仪器

1.1 材料

肉苁蓉产自甘肃省酒泉市瓜州县。

1.2 仪器与试剂

STI型液相色谱仪（赛智科技有限公司）；SHB-2V循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）：80-2离心机江苏大地自动化仪器厂）：BSA124S 型分析天平（赛多利斯科学有限公司）：KQ-500型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。儿茶素标准品购自坛墨质检标准物质中心（批号 00003310-01A）：乙脑、甲醇均为色谱纯：实验用水为超纯水。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：KromsstaTM柱（4.6x250mm．5pm）：流动相为乙腈-水（30：70．VN），流动：相流速为0.8mlAmin；进样量：10pL；紫外检测波长：260mm：柱温：25℃．

2.2 儿茶素标准曲线的绘制

准确称取 15 ℃干燥至恒重的儿茶素标准品 0.0155精确至0.0001g），用甲醇溶解并定容至25mL，配制0.602g／μL的标准溶液。精密吸取1.00、2.00、4.00、600、8.00mL对照品储备液于10mL容量瓶中。用甲醇定容，混合均匀，得标准系列溶液。进样并测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，计算线性回归方程。

Figl

The standard cuve of the catechin

2.3 样品中儿茶素的提取

2.3.1 提取工艺

精密称取腺干并粉碎的肉苁蓉药材2.0000g，加入15mL甲醇，在40kHz和50℃条件下超声提取30min，抽滤，滤渣再加入15mL甲醇重复提取3次，抽滤，合并滤液。将滤液浓缩近干，浓缩残余物以甲醇溶解并定容至5mL，静置过夜。测定前取出，放至室温。取上清液，过0.45μm滤膜后进行HPLC分析。

2.3.2 提取的单因素试验

对可能影响儿茶素得率的几个因素（科液比、超声温度、提取时间、重复提取次数）分别作单因素试验，测定提取液中儿茶素的峰面积值。计算儿茶素含量。

2.3.3 最佳提取条件的选择

以料液比、超声温度、提取时间、重复提取次数为因素，选择L3正交表进行四因素三水平试验，各处理重复3次，并进行方差分析。

2.4方法评价

2.4.1 精密度检查

吸取20pl样品溶液，重复进样6次，样品峰面积积分值的RSD为1.28％，表明仪器精密度良好。

2.4.2 重复性实验

制备5份样品溶液，分别吸取20pL进样，测定，峰面积积分值的RSD为123％。

2.4.3 稳定性实验

精密吸取同一样品溶液，在12小时内按05h的时间间隔重复进样7次，每次进样20pL，样品中儿茶素峰面积积分值的RSD为1.94％。

2.4.4 加标回收率实验

吸取已知浓度的供试品溶液05mL，加入0.602pg／uL的儿茶素标准品溶液0.1、0.2、0.3mL稀释至10mL混匀，分别进样20μL测定其峰面积积分值，求得儿茶素平均回收率为98.56％。

3 结果与讨论

3.1 色谱分析结果

标准品和样品提取液中儿茶素色道图分别见图和图2．在该条件下，保留时间3.423min处儿茶素可有效分离。

Fig2 The HPLC chromatogram of catechin standard

3.2 肉苁蓉中儿茶素提取的单因素试验

3.2.1 料液比其它实验条件同23.1．按不同料比2g：10ml．2g：15mL、2g：20mL、2g：25ml加入甲醇溶液提取，实验结果见图3。如图可知，料液比对儿茶素的提取有较大影响，最终选择2g：15mL为最佳料液比

3.2.2 超声温度

其它实验条件同2.3.1．按照不同的超声温度 30、40、50、60、70、80℃，实验结果见图4．如图可知，随着温度升高，儿茶素的提取率逐渐上升。50℃为最佳提取温度。

图4溶剂体积对儿茶素提取效果的影响

Fgs Effect of solvent volumes on the extraction of catechin

3.2.3超声时间

其它实验条件同23.1．按照不同的超声时间10、20、30、40、50.60min，实验结果见图5。如图可知，随着时间的增加，儿茶素的提取率有所上升，但是在30min以后，提取率基本保持不变。因此从节约时间成本的角度考虑选择最佳提取时间为30min。

图5 超声温度对儿茶素提取效果的影响

Fig.5 Effect of uhrasonic temperature on the extraction of catechin

图6 超声时间对儿茶素提取效果的影响

Fig.6 Effect of ultrasonic time on the extraction of catechin

3.2.4 提取次数

参照23.1方法分别提取1-4次，合并滤液分析，实验结果见图7．