摘要：目的：研究肉苁蓉醇溶成分对D－半乳糖所致衰老大鼠模型肝线粒体的保护作用。方法：用D－半乳糖制备衰老模型大鼠，连续灌服肉苁蓉醇溶成分6周，测定肝脏Ca2＋－ATP 酶活性、肝线粒体MDA 含量、膜流动性、PLA2 活性。结果：肉苁蓉醇溶成分显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2＋－ATP 酶活性，肝线粒体膜流动性（ P ＜0．01） ，显著降低肝线粒体MDA 含量、PLA2 活性（ P ＜0．01） ，但各指标不能恢复到青年组水平。结论：肉苁蓉醇溶成分对衰老模型大鼠肝线粒体具有保护作用，是其抗衰老作用的有效成分。

关键词：肉苁蓉；致衰大鼠；肝线粒体

肉苁蓉又名苁蓉、大芸、金笋、地精［1］，为列当科植物肉苁蓉（ Cistanvhe deseticola Y C Ma） 的带鳞片的干燥肉质茎。始载于《神农本草经》，列为上品，《本草经疏》、《本草汇言》、《月华子本草》等也多有记载。李时珍曰：“此物补而不峻，故有从容之兮。”肉苁蓉味甘、咸，性温，主产于我国的内蒙古、新疆、甘肃、青海、陕西等省区，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能，在我国已有两千多年的使用历史，现代药理学表

明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能。但有关肉苁蓉醇溶成分对D－半乳糖致衰大鼠肝脏Ca2＋－ATP 酶活性以及肝线粒体MDA 含量、膜流动性和PLA2 活性的影响未见报道。本实验通过肉苁蓉醇溶成分对致衰大鼠肝脏线粒体保护作用的研究以期进一步探讨肉苁蓉的抗衰老的有效成分。

1 实验材料

1．1 动物

纯系Wistar 大鼠30只，3～4月龄，体重180～210g，雌雄各半，由黑龙江省佳木斯大学实验动物中心提供。

1．2 药剂制备

肉苁蓉，由佳木斯药材公司提供。取肉苁蓉400g 用水浸泡30min，超声提取两次，每次30min，抽滤器抽滤后合并滤液，加乙醇反复多次沉淀，将乙醇溶解部分减压浓缩至无醇味，4℃贮存，临用时配成所需浓度使用。

1．3 主要仪器、试剂

仪器：岛津RF－5000型荧光分光光度计；赛多利斯PP－25型高灵敏度pH 计；GL－21M 高速冷冻离心机；722光栅分光光度计等。试剂：1，6－二苯基－1，3，5－己三烯（ DPH）由Sigma 公司提供；去氧胆酸钠由Amresco 公司提供；MDA试剂盒、活性氧试剂盒、Ca2＋－ATP 酶试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、双缩脲蛋白测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供；D－半乳糖（ D－gal） 由上海试剂二厂提供。

2 实验方法

2．1 动物分组、给药及处理

将30只大鼠随机分为3组，青年对照组、衰老模型组和模型给药组，每组10只。青年对照组每日上午皮下注射生理盐水，同时灌服温开水；衰老模型组每日上午按50mg／kg 剂量皮下注射D－gal，同时灌服温开水；模型给药组每日上午按50mg／kg 剂量皮下注射D－gal，同时按生药量2g／kg 灌服肉苁蓉醇溶成分。连续给药6周后，将动物处死，取材。

2．2 肝匀浆及肝线粒体制备

参照南京建成生物工程研究所提供的实验方法学，取肝脏1g 左右，用冷生理盐水漂洗，拭干称重，加入9倍体积预冷的匀浆介质，用电动匀浆机充分磨碎得肝组织匀浆，将肝组织匀浆3000r／min，离心10min，取上清液冻存待测。再按上述方法制备肝匀浆，取肝匀浆2000r／min 离心10min，弃沉淀，上清液在高速冷冻离心机中10000r／min 离心15min，沉淀物即为线粒体，将线粒体悬浮于介质中，进行指标测定。

2．3 指标测定

肝组织Ca2＋－ATP 酶活性、肝线粒体丙二醛（ MDA） 含量测定按试剂盒说明进行，Ca2＋－ATP 酶活性定义为每小时每毫克组织蛋白的ATP 酶分解ATP 产生1μmol 无机磷的量为一个ATP 酶活力单位。肝线粒体膜流动性、磷脂酶A2 活性测定参照文献方法进行［2，3］。线粒体膜流动性的大小通过肝线粒体膜的荧光偏振度（ P） 的高低表示，P 越高，膜流动性越小，反之，P 越低，则膜流动性越大。

2．4 统计学分析

实验数据以均数±标准差（ x ± s） 表示，应用SPSS11．5统计学软件进行统计学分析。

3 结果

肉苁蓉醇溶成分显著提高衰老模型大鼠肝脏Ca2＋ －ATP 酶活性，肝线粒体膜流动性（ P ＜0．01） ，显著降低肝线粒体MDA 含量、PLA2 活性（ P ＜0．01） ，但其并不能使所有指标恢复到青年组水平，见表1。

4 讨论

衰老是一种非常复杂的生物学过程，是机体在退化时期功能下降及生理紊乱的综合表现。近年来，研究发现在细胞、组织、器官衰老过程中，线粒体氧化损伤和功能的改变有着重要的作用和意义［4］。线粒体是细胞内重要的细胞器，是生成ATP 的主要场所。但是一旦线粒体受损，它还可以进一步引起机体自由基平衡的破坏，逐步导致全身性生理功能的下降。在生物体内，90％以上的氧分子在线粒体中被消耗，在生物氧化反应过程中，氧作为一种必需物质，一方面是维持生命能量代谢过程的重要成分；另一方面，氧可通过一系列化学反应生成有害的氧自由基，造成细胞损伤和机体衰老［5］。实验表明，衰老时细胞内，尤其是线粒体SOD 活性下降，MDA 含量增加［6］。自由基和活性氧直接或间接启动膜脂的过氧化作用对机体产生伤害，导致膜的损伤和破坏，严重时导致细胞死亡。本实验结果表明，衰老时机体抗氧化能力下降，氧自由基在细胞内堆积损伤生物膜。由于线粒体膜直接

接触活性氧，受到直接攻击，使膜脂质氧化形成大量过氧化脂质及丙二醛，而Ca2＋－ATP 酶活性的下降使胞浆Ca2＋浓度升高，Ca2＋是PLA2 的激活剂，导致线粒体PLA2 活性的升高。PLA2 会从不同方面造成线粒体功能下降进而影响机体正常功能：①水解自身磷脂使线粒体膜骨架脆性增加，产生大量自由基，导致膜受损，通透性增加；②改变膜磷脂的成分，影响膜流动性；③降解磷脂的产物损害呼吸链，影响氧化磷酸化并造成线粒体不可逆损伤［7］。④造成质子跨线粒体内膜转运能力下降及H＋－ATP 酶活性下降［8］。本研究发现，衰老大鼠肝线粒体膜流动性较青年组显著下降，证实衰老时会出现线粒体膜流动性的改变。其机制可能是：①氧自由基的作用：衰老大鼠肝脏抗氧化能力下降，自由基的增多会引起线粒体膜蛋白分子及脂质分子化学结构及构象的改变，并改变分子间的排列和相互作用，导致线粒体膜流动性降低；②脂质过氧化的作用：MDA 是脂质过氧化的主要产物，它能进入水相和膜蛋白、膜脂上的NH2 交联形成Schiff’s 碱而降低膜流动性［9］。③PLA2 活性的提高：PLA2 活性的提高必将导致膜磷脂水解，改变膜磷脂成分，进而改变膜结构导致膜流动性下降。本实验结果显示，肉苁蓉醇溶成分可提高肝脏Ca2＋－ATP 酶活性，肝线粒体膜流动性，降低肝线粒体MDA含量、PLA2 活性，但其并不能使各指标达到青年组水平。肉苁蓉醇溶成分具有提高免疫能力和雄性激素样作用［10］，本实验发现其也具有一定的抗衰老作用，估计可能是其中所含的黄酮类和苷类化合物使自由基生成减少，减轻自由基的损伤作用，保证Ca2＋－ATP 酶的活性，避免线粒体PLA2 活性的升高，从而减少了降低线粒体膜流动性各种因素的影响，使

线粒体膜流动性保持正常，保证了线粒体的功能。但其并不能使各指标达到青年组水平，也表明单纯的肉苁蓉醇溶成分并不能起到很好的抗衰老作用，它可能会与肉苁蓉的其它有效成分共同发挥作用。

参考文献：

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