王丽楠＇，陈 君＇，杨美华＇，陈士林，石钱，齐云，刘同宁（1．中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京 10009442．宁夏永宁县甘草种植场，宁夏 永宁 750100）

摘要：目的 建立肉苁蓉中苯乙醇苷的含量测定方法。方法 选用测定波长333nm，以松果菊苷为对照品，采用大孔树脂-紫外分光光度法对内苁蓉中苯乙醇苷的含量进行了测定。结果 松果萧苷在8-40mg＊L-1范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y＝2.3010X-0.0041（r＝0.9991），平均回收率为99.1％，RSD为0.4％，结论 该方法操作简便，结果准确，重复性好。可用于肉苁蓉的质量控制。

关键词：内苁蓉：苯乙醇指；大孔树脂-紫外分光光度法；含量测定

中图分类号：1927.2   文献标识码：A   文章编号：1004-2407（2008）02-067-03

Quantitative determination of total phenylethanoid glycosides in Cistanche desertiola

WANG Linan,CHEN Jun',YANG Mehua',CHEN Shiln,SHI Yue,QI Yun',LIU Tongning'(L Institite of Medidnal Plant Development,Chinese Academy of Medical Sdence,Peking Union Mediaal College,Beijing 100094,China:2.The Gly-yrrhea Bases of Yongning County of Ningia.Ningxia 750100)

Abstract Objective To establish a quantitative method for the determination of total phenylethanoid glyeosides in Cistanche desertiok.Method Using detection wavelength at333nm and cchinacoside as standand.macroporous resin-U V spectrophotomatry was developed to determine total phenylethanoid glycosides in Cistanche desertiok.Results The asbration cuve was in good linur rity over the range of 8-40mg*L-'with the mgression espuationY=2 3010X-0.004 1r=0.999 1).The average recovery wan 99.1% with RSD-0.4%.Conclusion The method is simple,accurate and reproducible.It can be used to control the quality of Cstanche desertiola.

Key words Cistanche desertiola:total pheny lethanoid glycosides macropors resh-UV spectrophotometry quantitative deter-mination

肉苁蓉（Gistanche desertiola）为列当科多年生寄生植物，是补肾壮阳、润肠通便之要药，始载于《神农本草经》，列为上品，主治阳痿、不孕、腰膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等，是临床常用中药之一，由于它生长在沙漠环境中，又具有沙漠“人参”的美誉”。现代研究表明，肉苁蓉具有壮阳、抗衰老、提高免疫功能、增强记忆力、降血脂和通便等作用，其主要活性成分是苯乙醇苷类。据文献报道，苯乙醇苷类具有抗不良刺激，增强学习记忆力和助阳等多方面的功能。肉苁蓉中苯乙醇苷的含量测定方法有硝酸铝-比色法”、重氮盐-比色法＂、紫外分光光度法，在硝酸铝-比色法中，以海胆苷为对照品，由于海胆苷中有两个邻二羟基，故可与铝盐络合形成稳定的有色化合物，在510nm波长处可进行比色测定，但肉苁蓉中其它非苯乙醇苷类的邻二羟基物质对本法测定有干扰，故造成结果偏高，在重氮盐-比色法中，应用苯乙醇苷类中的酚性基团与重氮盐能生成有色物质的原理，在486nm处进行测定，但肉苁蓉中其它非苯乙醇苷类含酚性基团的物质对本测定方法亦有干扰，影响结果的准确性。目前文献报道的紫外分光光度法，均是采用大孔树脂除去糖等杂质，富集纯化苯乙醇苷类有效成分，测定方法较比色法准确，但其样品前处理要经过多次回流提取、萃取等步骤，操作烦琐。针对上述问题，笔者对样品前处理方法进行了改进，并对最佳提取时间和提取溶剂等进行了考察。

1 仪器与试药

1.1 仪器 紫外-可见分光光度计（岛津2550型）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9143BS-III无锡市苏嘉实验设备厂）。

1.2 试药 D-101-1型大孔树脂购于天津市海光化工有限公司；松果菊苷对照品（批号111670-200502，供含量测定用）购于中国药品生物制品检定所；所用试剂均为分析纯。肉苁蓉药材由宁夏永宁县肉苁蓉种植场提供，初加工方法为：新鲜药材切成厚约2mm的小丁状，置干燥箱内干燥至干（60℃约12h），粉碎。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取松果菊苷对照品适量，置棕色量瓶中，用甲醇制成每1mL含0.4mg的溶液，即得。

mL使溶解，放冷，通过D-101-1型大孔树脂柱（柱长20cm，内径2cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用体积分数20％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用体积分数70％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，精密量取0.5mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.2.0.4，

0.6.0.8和1.0mL，分别置于10mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白对照于333nm处测定吸光度，以溶液质量浓度为横坐标，吸收度值为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：Y＝2.3013X-0.004 1，r＝0.9991．结果表明松果菊苷质量浓度在8～40mg＊L范围内与吸收度具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验 取一定质量浓度对照品溶液连续测定5次，测定吸收度，其RSD为0.14％，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取对照品溶液于室温放置0.1，

2,3.4和5h测定吸收度，RSD为1.60％，表明对照品溶液在5h内稳定。

2.6 重现性试验 精密称取同批样品6份，按上述含量测定方法进行测定，平均含量为0.83％，RSD为1.50％，表明重现性良好。

2.7 回收率试验 精密称取已知含量的肉苁蓉药材粉末5份，分别精密加入松果菊苷对照品适量，各份均按上述含量测定方法进行测定，平均回收率99.1％，RSD为0.4％（n＝5）．

2.8 样品测定 按2.2项下制备供试品溶液，对8批肉苁蓉药材进行苯乙醇苷的含量测定，结果见表1（均以干燥品计算）。

表1 8批肉苁蓉含量测定结果（-3）

3 讨论

结果表明：苯乙醇苷类有效成分主要富集在体积分数70％乙醇洗脱液中，其紫外吸收图谱与对照品溶液完全一致，且均在333nm处有最大吸收，故选择333nm为测定波长。

②提取时间的考察 取本品粉末约1g，6份，分别精密称定质量，各精密加入体积分数50％乙醇50mL，密塞，称定质量，分别回流提取2,3,4,5,6和7h．取出，放冷，照2.2项下供试品溶液的制备方法进行处理，分别制得供试品溶液，以甲醇为空白对照，各供试品溶液在333nm处测定吸收度，并分别计算含量（均以干燥品计算），结果见表2．结果表明，提取时间5h，提取效果最佳。

表2 提取时间的考察结果

③提取溶剂的考察 取本品粉末约1g，4份，分别精密称定质量，各精密加入体积分数30％，50％，70％和90％乙醇溶液50mL，密塞，称定质量，照2.2项下供试品溶液的制备方法进行处理，分别制得供试品溶液，以甲醇为空白对照，在333nm处测定各供试品溶液吸收度，并分别计算含量（均以干燥品计算），结果表明，以体积分数50％乙醇提取效果最好，含量最高。

④洗脱体积的考察 取本品粉末约1g，精密称定质量，照2.2项下供试品溶液的制备方法进行处理。分别以蒸馏水，体积分数20％乙醇各50mL洗脱，弃去洗脱液，继用体积分数70％乙醇，依次以50,20.10和10mL洗脱，分别收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并分别转移至10.5.2和1mL量瓶中。以甲醇为空白对照，各洗脱液分别在333nm处测定吸收度。结果表明，体积分数70％乙醇80mL即可洗脱完全。

从样品测定结果来看，8批不同时间采收的肉苁蓉药材中苯乙醇苷的含量差别较大，其中最高1批的含量（批号20060402）和最低1批的含量（批号20060419）相差近6倍。由于肉苁蓉中苯乙醇苷是其主要的活性成分，因此，建立准确可靠的苯乙醇苷含量测定方法是十分必要的，本实验简便快速，重现性好，结果准确，为肉苁蓉的质量控制提供了依据。