摘要: 目的对肉苁蓉的食用安全性进行毒理学研究。方法利用急性毒性试验、骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames 试验和90 d 喂养试验进行毒理学研究与评价。结果急性毒性试验结果表明肉苁蓉对雌、雄小鼠急性经口最大耐受量( MTD) 均＞ 20 g /kg 体重，其剂量大于人体推荐量的600 倍，说明受试物属于无毒级物质; 骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames 试验3 项遗传毒性试验的结果皆为阴性，未显示出致突变性; 90 d 喂养试验表明，肉苁蓉2 g /kg、4 g /kg、8 g /kg 体重3 个剂量组动物的身体、脏器的生长发育及血液生化指标等均无明显不良影响。结论在本研究条件下，未见肉苁蓉有明显的毒副作用。

关键词:肉苁蓉;毒性研究;食品安全

肉苁蓉( Cistanche Deserticola) 是列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉干燥带鳞叶的肉质茎，又名精笋、地精，始载于《神农本草经》［1］，主要产于内蒙古、甘肃、新疆、青海等地［2］。近年来国内外学者对肉苁蓉的化学成分、药理作用进行了广泛研究，结果表明肉苁蓉在增强机体免疫力、提高机体耐力、抗氧化以及调节神经系统和内分泌系统作用等方面都表达出了很好的活性［3 ，4］。当前肉苁蓉在医药和保健食品等领域的应用已越来越广泛，但长期食用是否会对机体产生一些不良影响，国内还鲜有报道。本文对其急性毒性试验、3 项遗传毒性试验( 骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames 试验) 和90 d 喂养试验等进行了研究，以期为肉苁蓉其他临床试验的安全剂量设计和主要观察指标、靶器官提供参考，并为其临床安全应用提供毒理学依据。

1 材料与方法

1． 1 受试物肉苁蓉粉，成人日推荐量为2 g。

1． 2 动物选用上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的清洁级健康ICＲ 小鼠及SD 大鼠。许可证号:SCXK( 沪) 2012 － 0002。

1． 3 菌株与试剂菌株: 组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100 和TA102 菌株4 株; 试剂: 溶血素( 2448612) 、谷丙转氨酶试剂盒( 利德曼210232I) 、谷草转氨酶试剂盒( 利德曼211093J) 、甘油三酯试剂盒( 利德曼211142J) 、葡萄糖试剂盒( 利德曼301101K) 、总胆固醇试剂盒( 利德曼211061J) 等。

1． 4 主要仪器日立7060C 全自动生化分析仪、奥林巴斯中国OLYMPUS BX － 51 显微镜、美国雅培CELL － DUN3700 雅培血球分析仪、上海诺顶仪器设备有限公司PSH － 200 生化培养箱等。

1． 5 试验方法

1． 5． 1 急性毒性试验选取18 g ～22 g 小鼠20 只，雌雄各半。试验前禁食16 h，不禁水。设剂量为20 g /kg体重， 24 h 内按0． 02 ml /g 体重容量经口给予3 次，后连续观察14 d，并记录动物中毒的表现和死亡情况。

1． 5． 2 Ames 试验采用鉴定合格的组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100 和TA102 菌株，以多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化系统，设5000 μg /皿、1000 μg /皿、200 μg /皿、40 μg /皿、8 μg /皿5 个浓度，同时设自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组，每剂量3 个平皿。在顶层琼脂中加入0． 1 ml测试菌株增菌液、0． 1 ml 受试物溶液和0． 5 mlS － 9 混合液( 当需要代谢活化时) ，混匀后倒入底层培养基平板上，37 ℃ 培养48 h，计数每皿回变菌落数。

1． 5． 3 骨髓细胞微核试验选取体重25 g ～ 30 g 小鼠50 只，雌雄各半，按体重随机分成5 组: 2． 5 g /kg、5． 0 g /kg、10． 0 g /kg 体重剂量组、蒸馏水对照组和40 mg /kg体重环磷酰胺阳性对照组。按0． 03 ml /g 体重容量间隔24 h 经口给予2 次，6h 后取胸骨骨髓涂片、染色，每只动物计数1000 个嗜多染红细胞、200 个PCE，计算微核发生率、PCE /NCE 值。

1． 5． 4 小鼠精子畸形试验选用体重25 g ～ 30 g 雄性小鼠25 只，按体重随机分成5 组: 2． 5 g /kg、5． 0 g /kg、10． 0 g /kg 体重剂量组、蒸馏水对照组和40 mg /kg体重环磷酰胺阳性对照组。按0． 03 ml /g 体重容量经口给药，连续5 d。末次给药后30 d 取小鼠双侧附睾尾涂片、染色，每只动物观察1000 个完整精子，记录各类畸形精子数，计算精子畸形发生率。

1． 5． 5 90 d 喂养试验各性别大鼠按体重随机分成4 组，每组10 只。试验设2 g /kg、4 g /kg、8 g /kg 体重3 个剂量组及基础饲料空白对照组。饲料摄入量以动物体重8%折算，分别将受试物均匀拌入饲料中经辐照灭菌供试，每月配制。试验期间动物单笼喂养，自由进食饮水，每天观察动物形态，记录饲料洒漏量，每周称1 次体重和2 次食物摄入量。第45 d 采血检测血常规及生化指标; 第90 d 采血检测血常规及生化指标，取肝、肾、脾、睾丸称重，并对肝、肾、脾、胃肠、睾丸、卵巢作病理学检查。

1． 6 数据统计χ2 检验和方差分析采用SPSS 11． 0统计软件进行分析。

2 结果

2． 1 急性毒性试验试验期间动物未见异常，MTD＞ 20 g /kg 体重( 相当于成人日推荐量的600 倍) ，属于无毒级。

2． 2 Ames 试验各剂量组的回变菌落数均未超过溶剂对照组回变菌落数的2 倍，Ames 试验结果为阴性。

2． 3 骨髓细胞微核试验各剂量组PCE /NCE 未少于溶剂对照组的20%，提示骨髓红细胞系统的增殖无明显抑制，对嗜多染红细胞微核的观察无明显影响。阳性对照组微核率( 雄性2． 32%，雌性2． 26%) 明显高于溶剂对照组( 雄性0． 08%，雌性0． 08%)( P ＜ 0． 01) ，而各剂量组( 雄性均为0． 1%，雌性0． 04% ～ 0． 08%) 与溶剂对照组比较差异均无统计学意义( P ＞ 0． 05) ，提示受试物未表现出使微核率上升的致突变效应。

2． 4 小鼠精子畸形试验阳性对照组畸形率( 9． 30%) 明显高于溶剂对照组( 1． 78%) ( P ＜ 0． 01) ，而各剂量组畸形率( 1． 60% ～ 1． 84%) 与溶剂对照组比较未产生明显改变，提示试验结果为阴性。2． 5 90 d 喂养试验试验期间，各组动物生长活动正常，试验结束时各剂量组动物体重、体重增重、进食量、食物利用率及脏体比与对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞ 0． 05) 。在喂养45 d 和90 d 时，个别动物血常规、生化指标与对照组比较，差异有统计学意义( P ＜ 0． 05) ，但均在正常范围内，其他各剂量组大鼠的血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、白细胞分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素、肌酐、血糖、总蛋白、白蛋白与对照组比较，差异均无统计学意义( P ＞ 0． 05) ( 表1) 。动物解剖时大体检查未见异常，病理学改变仅在个别个体中发生，各组标本病理变化无明显差异，因此认为被检脏器未见与受试物有关的病理学改变。

3 讨论

近年来因中药材应用领域的不断扩大，所引起的不良反应事件发生率也不断提高，而且个别药材的成分复杂，可能含有的毒性因子不明、毒性机制不清，致使开发应用受阻。阐明中药材作用机制，并采取有效措施预防不良反应事件的发生是急需解决的问题。肉苁蓉作为一种名贵的中药材，长期以来大家对其药效作用等研究取得很大进展，现代药理学研究表明，肉苁蓉除在作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能［5］。为了深入vwin.com 毒性和食用安全性的状况，本文从急性、遗传性和亚慢性等方面对其毒理学的表现进行了一系列研究。急性毒性试验是用于评价材料短期经口服用后对机体的毒副作用; Ames 试验主要是针对生物的基因突变进行评估; 骨髓细胞微核试验主要是对染色体结构完整性的变化进行评估; 小鼠精子畸形试验所反映的遗传学终点主要是对生殖细胞的遗传毒性进行评估; 90 d 喂养试验是通过较长时间喂受试材料，来了解其可能对动物引起有害效应的剂量、毒作用性质和靶器官，估计亚慢性摄入的危害性。本研究结果表明在肉苁蓉急性毒性试验过程中，未见动物出现明显的运动机能减退、呼吸困难、腹泻、眼睑下垂、震颤、虚脱及死亡等现象，对雌雄小鼠的MTD 均＞ 20 g /kg 体重，属于无毒级; 3 项遗传毒性试验结果皆为阴性，未表现出致突变性; 90 d 喂养试验中，动物生长活动及饮食正常，个别动物的血常规、生化指标与对照组的差异有统计学意义，但这些变化未见明显的时间相关性和剂量相关性，是属于正常范围内的波动性变化，其余血液学、生化检查及组织病理学检查结果与对照组的相比未见特征性改变。

参考文献

［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典( 一部) ［M］． 北京: 化学工业出版社，2005: 90．

［2］ 雷载权． 中药学［M］． 上海: 上海科学技术出版社，2001: 292．

［3］ 孙朝晖． 中药肉苁蓉的药理活性研究进展［J］． 赤峰学院学报，2010，26( 2) : 70 － 71．

［4］ 程齐来，陈君． 肉苁蓉属植物研究概况［J］． 中药材，2004，27( 10) : 789 － 791．

［5］ 吴晓春，史颖． 肉苁蓉的研究与临床应用［J］． 甘肃中医，2007，20( 12) : 49 － 51．