［摘要］ 目的: 研究肉苁蓉对大鼠运动能力及心肌线粒体抗氧化能力的影响。方法: 7 周龄清洁级雄性Wistar 大鼠120只随机分为静止ig 水组( C 组) 、静止ig 肉苁蓉组( M 组) ，运动ig 水组( T 组) 、运动ig 肉苁蓉1 ～ 4 组( TM1 ～ 4 组) 。每天ig 1次。TM1 ～ 4 组ig 剂量依次为6. 01，9. 97，13. 94，17. 90 g·kg － 1，ig 体积为5 mL·kg － 1 ，C，T 2 组ig 等量蒸馏水。4 周力竭游泳训练后，测定体重、力竭游泳时间及心肌线粒体中丙二醛( MDA) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 含量等与疲劳作用相关的指标。结果: TM 各组体重大于T 组( P ＜ 0. 05) ，力竭游泳时间均长于T 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组间无显著性差异。力竭游泳导致大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高，T 组及TM 1 ～ 4 组分别升高至( 5. 96 ± 0. 71) ，( 5. 05 ± 0. 36) ，( 5. 05 ± 0. 92) ，( 5. 06 ± 0. 16) ，( 5. 05 ± 0. 25) μmol·L － 1 ，且TM 各组明显低于T 组( P ＜ 0. 01) ; SOD，GSH-Px 活性显著下降( T组及T1 ～ T4 组SOD 分别下降至( 209. 7 ± 817. 21) ，( 249. 85 ± 10. 93) ，( 253. 98 ± 9. 64) ，( 259. 311 ± 4. 57) ，( 259. 461 ± 5. 73)U·mL － 1 ，GSH-Px 分别下降至( 57. 95 ± 11. 95) ，( 68. 58 ± 6. 01) ，( 70. 63 ± 5. 83) ，( 70. 78 ± 7. 04) ，( 72. 56 ± 4. 34) U·mg － 1 ，且TM 各组明显高于T 组( P ＜ 0. 01) ; TM 各组间各项指标无显著性差异。结论: 肉苁蓉具有提高大鼠运动能力和心肌线粒体抗氧化酶活性的作用，从而减轻自由基对心肌线粒体膜和肌浆网膜造成损伤，抑制大强度力竭运动造成的心肌线粒体氧化损伤，延缓疲劳发生; 有显著作用的剂量为6. 01 g·kg － 1。

［关键词］ 肉苁蓉; 运动能力; 抗自由基; 心肌; 线粒体

肉苁蓉为列当科肉苁蓉属多年寄生草本植物。主产于我国内蒙、新疆等省( 区) 及伊朗、蒙古、印度等国［1-3］。因其生长在荒漠中，具有极好的药用价值，素有“沙漠人参”之美誉。李时珍曰: “此物补而不峻，故有从容之兮”。其味甘、咸、性温。有补肾阳、益精血、润燥滑肠、抗疲劳之功效。在我国，其药用历史有1 800年之久，始载于《神农本草经》，列为上品。历代药书均有记载。据统计，在历代增力中药处方中肉苁蓉的出现率占第一位，而在抗老防衰类方剂中仅次于人参居第二位［4］。目前已知肉苁蓉中化学成分主要为肉苁蓉总苷( GCs，主要活性成分为苯乙醇苷类) ; 烃类; 生物碱; 黄酮类; 氨基酸;环烯醚萜类; D-甘露醇、β-谷甾醇; 多糖及无机微量元素等［5-12］。当前主要应用其补肾壮阳及润肠通便之功效，而针对缓解运动性疲劳功效的应用相对较少。本文拟通过对大鼠ig 不同剂量的肉苁蓉提取物以观察其对大鼠运动能力以及心肌线粒体抗氧化能力的影响，探索其清除大鼠力竭运动后心肌线粒体自由基代谢产物，减轻自由基对心肌线粒体的损伤，消除疲劳，增强运动能力的作用，从而为肉苁蓉更好的应用于运动营养食品领域提供理论依据。

1 材料

1. 1 动物清洁级雄性Wistar 大鼠120 只，7 周龄，平均体重( 256. 9 ± 15. 2 ) g，北京大学医学部实验动物科学部提供，合格证编号SCXK ( 京) 2006-0008。在整个实验过程中，实验室内温度保持在( 22 ± 2) ℃，相对湿度55% ～ 75% ，光照时间随自然变化。所有实验大鼠均以基础饲料( 北京大学医学部实验动物科学部提供) 和蒸馏水常规饲养，自由饮食。实验时间为35 d，正式训练时间为4 周。

1. 2 用药肉苁蓉Cistanche deserticola Y． C． Ma，产地内蒙，北京同仁堂购得，并经天津中瑞药业有限公司高占友高级工程师鉴定。提取方法: 将干燥带鳞叶的肉苁蓉粉碎成粗粉，用60% 乙醇水浴提取3次，每次2 h。合并提取液冷藏24 h 过滤，滤液减压回收乙醇，浓缩成浸膏( 2 g 生药/1 g 浸膏) ，备用［13］。

1. 3 试剂丙二醛( MDA) ，采用比色法测定; 超氧化物歧化酶( SOD) ，采用黄嘌呤氧化酶法测定; 谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px) 采用化学比色法测定，均采用南京建成生物工程研究所提供试剂盒，并严格按照使用说明操作。

2 方法

2. 1 动物分组为使实验大鼠适应新环境，首先将购回的大鼠分笼适应性饲养7 d，适应期的第4 天下午以随机分组法，分为7 组，即静止ig ( 灌胃) 水组( C 组) 、静止ig 肉苁蓉组( M 组6. 01 g·kg － 1 ) ，运动ig 水组( T 组) 、运动ig 肉苁蓉1 ～ 4 组( TM 1 ～ 4组) ，每组15 只( 剔除不符合实验要求的大鼠) 。

2. 2 训练及测试方案T 组及TM 各组大鼠均采用游泳运动。采用长100 cm，宽50 cm，高60 cm 的玻璃泳槽作为大鼠游泳训练装置，水深50 cm，水温( 31 ± 2) ℃，为防止大鼠在水面漂浮不动，特在游泳箱底部放置佳宝“AP1500”型水泵形成流动水。训练4 周，第1 周不负重，第2 周负2% 体重，第3 周负4% 体重，第4 周负5% 体重，每次游泳训练至力竭。训练期间，采用专业灌胃器，每天ig 1 次。TM 1 ～ 4组ig 剂量依次为6. 01，

9. 97，13. 94，17. 90 g·kg － 1 的肉苁蓉提取物，ig 体积为5 mL·kg － 1 ，C，T 2 组ig 等量蒸馏水。大鼠的ig 剂量是根据人体用量综合确定。据《全国中草药汇编》( 上册) ［14］查得人体的肉苁蓉用量为2 ～ 6 钱( 约为66. 78 ～ 198. 9 g) ，根据人与实验动物药物剂量的换算方法，计算得出大鼠的肉苁蓉高低剂量区间为: 6. 01 ～ 17. 90 g·kg － 1。力竭标准以动物下沉后10 s 不露出水面为度。处死前的最后1 次为无负重力竭游泳训练，力竭判断标准同上，记录达力竭的游泳时间。测定大鼠开始游泳至力竭所用时间为大鼠力竭运动能力［15］，运动后即处死。处死时采用戊巴比妥钠65 mg·kg － 1 麻醉，冰盘暴露腹腔，迅速取心室肌组织，加入分离介质后在冰浴中剪碎，匀浆器匀浆后置离心管，据Vaghy 报道方法在0 ～4 ℃下采用差速离心分离线粒体［16］。

2. 3 统计学方法采用SPSS 12 软件对所有数据进行处理，数据用珋x ± s 表示，显著性检验为t 检验。P ＜ 0． 05 有统计学意义。

3 结果

3. 1 体重及运动能力各组大鼠体重均呈上升趋势。其中C 组大鼠体重最大; M 组与C 组接近，但无显著性差异; TM 各组间接近，但无显著性差异，且均少于M 组( P ＜ 0. 05 ) ，大于T 组( P ＜ 0. 05) 。TM 各组力竭游泳时间均长于T 组29. 45 min 以上( P ＜ 0. 01) ; 而TM 各组间无显著性差异。见表1。

3. 2 心肌线粒体MDA［17］，GSH-Px［18］，SOD［17］ 含量力竭运动引起大鼠心肌线粒体MDA 含量升高，T组高于C 组( P ＜ 0. 01 ) ; TM 各组高于M 组( P ＜0. 05) ; TM 各组均低于T 组( P ＜ 0. 01) 但仍高于C组; GSH-Px 含量下降，T 组低于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM各组低于M 组( P ＜ 0. 05) ; TM 各组高于T 组( P ＜0. 01) ，但仍低于C 组; SOD 含量下降，T 组低于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组低于M 组( P ＜ 0. 05) ; TM 各组高于T 组( P ＜ 0. 01) ，但仍低于C 组; TM 各组间各项指标无显著性差异。见表2。

4 讨论

4. 1 肉苁蓉对大鼠体重及力竭运动能力的影响体重方面，在整个实验过程中，M 组呈逐渐增长的趋势，与C 组无显著性差异，说明补充肉苁蓉不会对大鼠的生长发育产生不良影响。T 组小于C 组( P ＜ 0. 01) ，TM 各组小于M 组( P ＜ 0. 05) ，说明负重力竭性游泳对大鼠的生长发育产生了一定的影响。TM 各组大于T 组( P ＜ 0. 05) ，说明补充肉苁蓉对于大鼠负重力竭性游泳过程中的生理机能调节和促进生长发育具有一定作用。而TM 各组间未出现

显著性差异，则说明补充肉苁蓉虽然对负重力竭性游泳过程中大鼠的生理机能调节和生长发育具有一定功效，但根据人体用量综合确定服用的不同剂量之间无显著差异。TM 各组未出现疲劳症状; T 组只有部分出现一定疲劳症状，但未出现体形瘦弱，皮毛杂乱无光泽甚至脱落等症状说明递增负荷的训练未对大鼠造成过度疲劳。力竭运动能力方面，力竭时间是机体的抗应激能力、抗疲劳能力等多种作用的综合体现，是衡量机体运动能力的重要直接指标［19］。TM 各组比T 组延长了29. 45 ～ 32. 43 min( P ＜ 0. 01) ，而TM 各组间无显著性差异。说明服用肉苁蓉可以有效延长大鼠力竭游泳时间，缓解运动性疲劳，但根据人体用量综合确定服用的不同剂量之间无显著差异。肉苁蓉延缓运动性疲劳的机制可能为以下几方面: 肉苁蓉可以提高抗氧化酶活性，从而提高大鼠运动时自由基的消除［20-21］; 肉苁蓉中含有多种多酚类、苷类物质，其直接具有消除自由基的功能［20-22］;肉苁蓉具有补肾壮阳作用，可以改善大负荷运动造成的下丘脑-垂体-性腺轴机能，促进大鼠睾酮的分泌，有利于机体合成代谢，具有抗疲劳功效［23］; 肉苁蓉中含有多种有效成分促进机体能量代谢，起到抗疲劳作用［24-26］。

4. 2 肉苁蓉对心肌线粒体的抗氧化能力的影响在正常情况下体内自由基的产生和清除处于一个动态平衡状态［27］。力竭运动时，机体耗氧量增加1 020倍，而肌纤维的耗氧量是安静时的100 倍，其中大部分的氧气在心肌线粒体呼吸链中被氧化成水，但有2% ～ 5% 的氧气被还原成自由基［28］。自由基与70 多种疾病有关，也是诱发疲劳和致使疲劳不易恢复的原因之一。骨骼肌特别是心肌组织有较高的基础代谢率，且心肌抵御氧自由基的能力较差，对过氧化作用具有高敏感性，容易受到自由基的攻击产生自由基损伤。组织线粒体中MDA 是细胞脂质过氧化的一种主产物，生物膜脂质不饱和脂肪酸极易受到自由基的攻击而发生过氧化，所以组织线粒体MDA 含量是目前公认的衡量机体自由基代谢的敏感指标［29］。其生成量不仅反映氧自由基生成与否，而且还反映脂质过氧化程度，因而测定MDA 含量可推测脂质过氧化程度。机体内存在清除自由基、减轻其危害的主要物质是抗氧化酶，其中SOD 是处于自由基防御前沿的抗氧化酶之一［30］。SOD 是需氧生物体内数千种酶中以氧自由基为底物的唯一酶，该酶对底物显示很强的专一性，而且催化效能很高。其通过催化超氧阴离子形成过氧化氢而清除超氧阴离子，保护机体免受损伤，同时在一定范围内，自由基代谢增强时，SOD 会代偿性增加。另外，SOD 使超氧阴离子成为细胞内自由基的排污槽，Koppeno［31］ 以热水学理论支持了“排污槽”的设想，并研究发现SOD 清除超氧阴离子自由基，正好适合超氧阴离子自由基充当为电子转移的自由基“排污槽”。故SOD 活性的高低是机体抗氧化能力强弱的标志。GSH-Px 是机体广泛存在的一种重要的抗氧化酶，主要存在于细胞液与线粒体内，与SOD，CAT 一同构成了对抗机体活性氧的三道防线，可催化GSH对过氧化氢的还原反应，从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用［32］。从实验结果分析: T 组与C 组相比较: 大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高( P ＜ 0. 05 ) ，SOD，GSH-Px 含量显著降低( P ＜ 0. 01) ; TM 各组与M 组相比较: 大鼠心肌线粒体中MDA 含量显著升高( P ＜ 0. 01) ，SOD，GSH-Px 活力显著降低( P ＜0. 05) 。说明肉苁蓉一方面通过改善机体供氧能力，改善运动机体微循环，增强机体免疫力，使SOD增加，活力增强，降低心肌的过氧化脂质( LPO) 含量; 另一方面可以通过减少机体超氧阴离子自由基的生成，而使SOD 的消耗相应降低。两方面的共同作用能够调节机体维持SOD 的动态平衡，非常显著提高大鼠力竭运动心肌组织SOD 活性，对清除机体自由基、减轻自由基对线粒体膜和肌浆网膜造成损伤，以及减轻对酶蛋白的氧化损伤起到积极作用，从而延缓疲劳发生。TM 各组间MDA 含量，SOD，GSH-Px 活力差别较小，无显著性差异。说明肉苁蓉具有改善大鼠因大强度力竭运动引起的自由基代谢紊乱、抑制心肌线粒体氧化损伤、缓解疲劳的作用; 有显著作用的剂量为6. 01 g·kg － 1 ，超过此剂量的肉苁蓉并不能进一步显著提高大鼠运动能力和抗自由基的能力。

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