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肉苁蓉又名大芸为列当科二年寄生草本植物。性味甘、咸、温入肾、大肠经主要功用是补肾壮阳、益精血、润肠通便常用于治疗阳痿不孕腰膝酸软筋骨无力肠燥便秘等症状在历代增力的中药古方中出现率最高［1］ 素有“沙漠人参”之称。明代李时珍说：“补而不峻故有苁蓉（从容）之号”。肝糖原含量是检测保健食品抗疲劳作用的重要指标［2］ 。本研究旨在通过小鼠负重游泳试验观察肉苁蓉对负重游泳小鼠肝脏组织结构及肝脏糖原的影响并首次通过检测肝脏一氧化氮合酶3（nitric oxide synthase3NOS3）的表达量研究NOS3 和糖原合成的关系探讨肉苁蓉提升运动能力的可能分子机制。
1 材料
1∙1 动物 30只雄性昆明种小鼠清洁级体重（20±0．5）g由内蒙古大学动物中心提供。
1∙2 药品及试剂 肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）产于内蒙古额吉纳旗并已鉴定。水煎浓缩成相当于每毫升含生药1g 的水煎液原液4℃ 冰箱保存。一氧化氮合酶3（NOS3）多克隆抗体：武汉博士德生物工程有限公司。S－P试剂盒：福建迈新试剂公司。
1∙3 仪器 JD－80彩色图像分析仪：南京。
2 方法
2∙1 动物分组、给药及处理 昆明种小鼠适应饲养3天后随机分为正常组、运动组、肉苁蓉组3组每组10只。正常组和运动组灌服生理盐水肉苁蓉组灌服肉苁蓉水煎液每日1次0．2ml／次连续15天。末次给药1小时将运动组、肉苁蓉组两组小鼠尾部负重1g（5％W）铅坠放入高50cm、长50cm、宽35cm 的水池中游泳温度保持在（30±0．5）℃观察小鼠小鼠停止游泳用木棍刺激其运动持续90分钟运动后正常饮食。
2∙2 肝脏组织学观察 休息10小时后连同正常组小鼠脱颈法处死取出肝脏10％中性甲醛固定经脱水、透明、浸蜡、包埋制成4μm 厚的连续切片切片采用HE 染色法观察各组肝脏组织结构。
2∙3 糖原染色 4μm 厚的连续切片常规脱蜡至水入1％过碘酸液37℃15分钟流水冲洗后入Schiff 液作用60分钟流水冲洗梯度乙醇脱水二甲苯透明中性树胶封片镜下观察染色结果。
2∙4 NOS3 表达的测定 免疫组织化学染色法检测。分析方法：在光镜下以目测半定量法初步观察NOS3 阳性产物呈深棕黄色或棕黄色阳性产物定位于肝细胞的胞浆内或肝细胞间的内皮细胞的胞浆内蓝色背景为阴性。然后采用彩色图像分析系统分析测量阳性反应物的灰度值在40倍物镜下每张片子随机测量4个视野的参数取其平均值用此参数反映NOS3 染色强度的变化。
2∙5 统计分析 数据以（x±s）表示采用SPSS11．0统计软件包进行t 检验。
3 结果
3∙1 肝脏组织结构变化 正常对照组肝小叶结构清晰细胞索排列整齐肝窦正常肝细胞无明显病变核结构清晰。运动组正常组织结构消失小叶界限不清细胞索紊乱大部分肝窦消失；肝细胞广泛性的空泡变性表现为细胞体积增大胞浆疏松、浅染乃至清亮、透明部分肝细胞呈典型的气球样变可见少量灶性或点状坏死。肉苁蓉组肝细胞呈轻度浊肿但排列规整细胞内无明显空泡及疏松细胞索排列较整齐细胞核结构较清晰。
3∙2 肝糖原染色结果 正常肝细胞中均有糖原存在分布均匀无空泡现象（见图1－1）。运动组糖原较少散在分布在肝细胞部分区域出现空泡现象（见图1－2）。肉苁蓉实验组糖原丰富但在细胞的一侧聚集很多（见图1－3）。
3∙3 光镜观察NOS3 的表达及图像定量分析正常组肝细胞的细胞质中有强阳性表达呈弥散状分布尤其在双核细胞中有强阳性表达内皮细胞有阳性表达（见图2－1）。运动组肝细胞和内皮细胞的细胞质中表达均减弱（见图2－2）。肉苁蓉组肝细胞的细胞质有阳性表达内皮细胞中有强阳性表达（见图2－3）。分析结果见表1。
4 讨论
糖是维持人体运动能力的主要能源物质糖原是可以迅速动用的葡萄糖贮备机体内糖贮备减少必将引起运动能力下降。糖在人体内的总量一般不超过500g在体内分布：肝糖原有70～100g；体液糖20g主要是葡萄糖其中血糖约6g肌糖原350～400g。大量运动时肌糖原分解供肌肉收缩当肌糖原耗竭时为维持血糖水平肝糖原迅速分解成葡萄糖并将其释放入血当肝糖原贮备耗竭时葡萄糖的产生会明显下降导致低血糖。血糖是包括大脑在内的中枢神经系统的主要能源物质若血糖水平很低便会出现低糖症致使脑机能下降大脑不能维持正常功能出现疲劳和虚弱表现［3］ 过度疲劳会使运动员不仅表现为疲乏无力、精神萎靡、头脑思维混乱等症状甚至被迫停止训练有的甚至出现心肾功能的改变。运动员大量运动后如何促使运动员体能迅速恢复成为运动学界研究的重点课题。大量研究证明机体大量运动后会产生大量H＋ 、自由基、乳酸等影响细胞正常代谢的物质同时由于细胞内葡萄糖的匮乏导致机体发生运动性疲劳和细胞损害。本研究结果显示大量运动后肝脏组织结构损害非常严重同时也影响到细胞的合成代谢如肝糖原减少。服用肉苁蓉的小鼠在大量运动后可观察到肝脏损害减轻且肝糖原含量显著多于运动组显示肉苁蓉具有肝脏保护作用可促进糖原合成维持机体正常的生理机能。NO 是近几年被运动界高度重视的一个小分子物质一氧化氮合酶（NOS）是NO 生成的主要限速因子目前已经确认NOS 有3种类型的同工酶它们分别为NOS1（nNOS）、NOS2（iNOS）、NOS3（eNOS）。eNOS：即NOS3内皮型一氧化氮合酶主要分布于内皮细胞、肝细胞生成的NO 主要参与生理功能如保持血管舒张、增加血流量、调节血压、抑制血小板凝集、维持细胞的正常代谢等［4］ ；nNOS：即NOS1被称为神经元型一氧化氮合酶它存在于神经元细胞、骨骼肌细胞等主要参与神经发育、神经分泌、学习和记忆过程；iNOS：即NOS2
被称为诱导型一氧化氮合酶主要存在于平滑肌细胞、巨噬细胞、淋巴细胞中此酶一旦诱生可持续合成NO直至底物耗尽或细胞死亡目前认为参与细胞损伤［5］ 。本研究结果表明大量运动后内皮细胞和肝细胞NOS3 表
达减弱由此产生的NO 减少使血管不能有效扩张血流量减少合成糖原的原料不能运输到肝细胞故糖原合成减少；肉苁蓉可上调内皮细胞和肝细胞的NOS3 表达反应性扩张血管、增加血流量、加快运输糖原合成原料的能力加速糖原合成维持机体处于正常生理代谢水平。故上调NOS3 的表达可能是肉苁蓉提升运动能力、保护肝脏和减轻运动性疲劳的重要作用机制。
参考文献
1 周志锦∙肉苁蓉的研究进展∙中医药信息199513（5）：28∙
2 何米英严卫星∙抗疲劳试验中肝糖原测定的意义探讨∙中国食品卫生杂志199810（6）：1∙
3 陈岷叶子坚李琼∙运动中糖的分解代谢∙中国临床康复20048（33）：7519∙
4 徐健方张漓冯连世∙运动与NO/NOS 系统和CO/HO 系统的研究进展∙中国运动医学杂志200423（4）：453∙
5 吴惺陈彦克马廉亭∙诱导型一氧化氮合成酶在迟发性血管痉挛中的作用∙中华实验外科200522（2）：203∙
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