摘　要：目的：研究肉苁蓉提取物对感染性休克大鼠急性肺损伤的影响‚探讨感染性休克治疗方法。方法：采用盲肠结扎穿孔术（CLP）复制感染性休克模型‚观察肺组织病理学变化‚测定急性肺损伤（ALI）生物学指标。结果：生理盐水组肺间质水肿‚肺泡腔内可见大量细胞浸润和血浆蛋白渗出‚肺血管内皮细胞损伤‚肺湿干重比‚肺泡灌洗液中中性粒细胞比例‚蛋白含量及肺泡通透指数‚肺毛细血管通透性均显著升高‚肺组织丙二醛（MDA）‚超氧化物歧化酶（SOD）‚髓过氧化物酶（MPO）均显著升高。大黄和肉苁蓉给药组‚上述指标均较生理盐水组显著下降。结论：肉苁蓉及大黄对感染性休克大鼠急性肺损伤具有良好保护作用‚其机制可能是通过抑制中性粒细胞在肺组织的浸润‚减少氧自由基对肺组织的损伤实现的。

关键词：肉苁蓉；大黄；感染性休克；急性肺损伤

感染性休克是临床急危重症‚寻求有效治疗药物一直是临床和基础研究的重大难题。感染性休克的中医病机是正虚邪实‚单纯针对机体邪盛采取的攻下疗法是有效治疗措施之一‚但如果将感染性休克治疗仅局限于攻下治疗也难免失之偏颇‚重视扶正补虚治疗显得同等重要。肉苁蓉是传统补益类中药‚证实其具有增强细胞DNA 合成率‚抗氧自由基等细胞保护功能‚为此笔者实验观察了肉苁蓉对感染性休克肺组织损伤的作用‚以求为感染性休克扶正补虚治疗提供有效探索。

1　材料与方法

1．1　动物　体重200～250g 健康雄性SD 大鼠40只（华中科技大学实验动物中心提供‚质检号TJLA－2003－167）随机分为四组：生理盐水组（n＝8）‚1g/ml大黄组（n＝8）‚1g/ml 肉苁蓉组（n＝12）‚3g/ml 肉苁蓉

组（n＝12）。实验动物分别采用相应药物常规灌胃15天‚1日2次‚（大黄和肉苁蓉提取物均系本院中药制剂室汪均植博士提供‚浓度均以每毫升所含生药克数表示‚给药剂量200mg/kg）实验动物均在盲肠结扎穿孔术［1］ 后12小时采集标本。

1．2　感染性休克大鼠肺组织学检查　每组各取动物肺脏左叶少许‚经10％甲醛固定‚石蜡包埋切片‚HE染色后‚用普通光学显微镜观察‚并在此基础上再取肺组织制成1mm3 小大。用25％戊二醛溶液固定‚然后固定于1％四氧化锇液中‚乙醇‚丙酮脱水‚经Epon81包埋‚制备超薄切片后‚行铀－－－铅双重染色‚用透射电镜观察。

1．3　大鼠肺组织湿/干重比‚及肺泡灌洗液中细胞计数比‚蛋白含量测定　开胸取出肺脏‚称湿重后‚置烤箱（80℃‚20h）烤至衡重‚称干重‚计算湿/干重比。另一批大鼠‚开胸后行肺泡灌洗‚灌洗液在显微镜下计细胞总数‚细胞分类。考马氏亮蓝法测定蛋白含量‚计算肺通透指数（肺泡灌洗液蛋白/血浆蛋白‚LPI）。

1．4　大鼠肺血管通透性（PVP）变化　按照Zhou 等［2］介绍的方法‚各组动物在给药后‚均在作盲肠结扎穿孔术同时股静脉注射Evans 蓝（50mg/kg）‚将动物开胸取出肺脏‚剪去周围组织‚将肺浸泡在甲酰胺溶液中（甲

酰胺用量按动物体重20mg/100g）‚置45～50℃温箱中温育72h‚待组织中色素全部浸出‚取出组织‚离心‚取上清液‚用721型分光光度计620nm 进行比色‚根据标准曲线计算Evans 蓝含量来测定PVP 的变化。

1．5　大鼠肺组织MDA 的测定　采用硫代巴比妥酸（TBA）法［3］ 测定MDA 活性‚本法微量‚快速‚简便‚准确。主要根据MDA 可以与TBA 结合生成红色产物在532nm 处存在最大吸收峰的原理。50ml 待测标本加4ml1．67mo/l 的硫酸‚0．5ml10％磷钨酸‚混匀‚3000r/min离心10min‚沉淀再同上处理1次‚然后加1ml 双蒸水‚1mlTBA 溶液‚95℃水浴60min‚用5ml 正丁醇提取‚四乙氧基丙烷作为标准品‚终浓度为1nmo/l L‚荧光分光光度计532nm 处测定吸光值。

1．6　大鼠肺组织SOD 的测定　采用黄嘌呤氧化酶法［4］ 测定SOD 活性（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）。

1．7　大鼠肺组织MPO 测定　取肺组织于等渗盐水中尽量洗净残血‚置于含0．5％十六烷基三甲基溴化铵的磷酸缓冲液（pH6．0）中制成5％的匀浆‚按试剂盒说明书操作。

1．8　统计学方法　实验数据均以均数±标准差（﹣x±s）表示‚SPSS 软件进行单因素方差分析和相关分析。

2　结果

2．1　肉苁蓉和大黄对感染性休克肺组织湿/干重比‚及肺泡灌洗液中细胞计数比‚蛋白含量的影响　见表1。

2．2　肉苁蓉和大黄对大鼠肺组织形态学改变的影响大体观察：生理盐水组肺脏体积明显增大‚呈暗红色‚表面可见不同程度充血水肿‚边缘部分大量肺梗死灶。大黄和肉苁蓉给药组肺脏呈浅红色‚表面轻度充血水肿‚未见明显肺梗死灶。光镜观察：生理盐水组见肺泡‚肺间质充血水肿‚肺泡腔内大量弥漫性中性粒细胞浸润‚部分有脓肿形成‚可见不同程度的肺不张‚坏死‚代偿性肺气肿‚血栓及类似透明膜形成。大黄和肉苁蓉给药组上述病变明显减轻。电镜观察：生理盐水组肺泡上皮细胞肿胀‚板层小体排空现象明显‚形成大空泡‚毛细血管内皮细胞肿胀‚内皮细胞之间连续损伤‚细胞间隙增宽‚毛细血管及肺泡基底膜疏松‚增宽‚不规则增厚‚厚薄不均。肉苁蓉和大黄给药组肺泡上皮细胞肿胀不明显‚板层小体排空减轻‚形成空泡数量少‚体积小‚毛细血管内皮细胞之间连接接近正常‚基底膜轻度疏松‚不规则增厚。3mg/L 肉苁蓉给药组较1mg/L 肉苁蓉给药组肺组织形态学改变范围更小‚肺

损伤程度更轻。

2．3　肉苁蓉和大黄对大鼠肺通透指数（LPI）和血管通透性（PVP）的影响　见表2。

2．4　肉苁蓉和大黄对大鼠肺组织MDA‚SOD‚MPO 活性的影响　见表3。

3　讨论

多器官衰竭是感染性休克后期病情不可逆转和死亡率高的根本原因［15］ ‚保护器官功能对降低感染性休克临床高死亡率具有重要意义。肺脏作为多器官衰竭的首发器官‚1/3感染性休克患者死于急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合症（ARDS）。急性肺损伤的主要病理生理机制是大量中性粒细胞在肺组织内聚集和活化‚与血管内皮细胞粘附的同时‚转移单电子的还原型辅酶Ⅱ氧化酶浓度增高而引起呼吸爆发‚产生大量氧自由基‚通过较强的氧化作用引起细胞膜和膜性结构的损害和功能障碍［6］ 。脂质过氧化物反映组织中氧自由基的变化‚与肺损伤的程度有直接的量相关［7］ ‚在机体的酶与非酶抗自由基氧化系统中‚SOD 的活性与组织损伤度保持良好的相关性［8］ 。大黄和肉苁蓉给药组MDA 和SOD 活性与生理盐水组相比较具有显著差异（P＜0．01）。李春盛等研究表明大黄具有保护急性肺损伤肺泡上皮和血管内皮的作用‚大黄对肺的保护作用机制可能是通过抑制NO 和iNOS 活性实现的。本实验结果再次证明大黄对肺泡上皮和血管内皮的良好保护作用‚同时发现大黄还可能通过减少中性粒细胞在肺组织内的聚集‚减轻自由基生成而达到保护肺组织的作用。肉苁蓉具有增强免疫功能‚抗衰老‚增强细胞DNA 合成率等广泛的药理作用［9］ 。实验结果表明‚肉苁蓉给药组肺系数‚肺通透指数‚肺泡灌洗液中性粒细胞比例‚肺血管通透性均显著下降‚肺组织MDA 活性下降（P＜0．01）‚SOD 显著上升（P＜0．01）‚MPO 活性下降。同时形态学观察发现肺组织损伤程度明显减轻‚中性粒细胞浸润减少‚且3mg/L 肉苁蓉给药组较1mg/L 肉苁蓉给药组肺损伤程度更轻‚存在良好的量效关系。提示肉苁蓉对急性肺损伤具有较显著的保护作用。其机制可能为：①抑制炎性细胞肺内迁移‚减少中性粒细胞等被激活产生的氧自由基‚使生物膜得到保护；②促进核酸和蛋白质合成‚对肺损伤具有保护作用。③增强吞噬细胞免疫功能‚减轻内毒素造成的肺组织损伤。该实验结果为临床感染性休克急性肺损伤扶正补虚治疗提供了实验基础。

参考文献：

［1］　金惠铭．盲肠结扎穿孔术后的败血症模型［J］．中国病理生理杂志‚1990‚6（2）：126－127．

［2］　Zhou WG‚Mc Collum MO‚Levine BA‚et al．Role of platelet activating factorin pancreaatitis associated acute lung injury in the rat［J］．Am J Pathol‚1992‚140：971．

［3］　汪谦‚朱晓峰‚赵西龙．现代医学实验方法［M］．北京：人民卫生出版社‚1997．508．

［4］　张秀明‚李健斋‚魏明竟．现代临床生化检验学［M］．北京：人民军医出版社‚2001．896．

［5］　罗正曜．休克学［M］．天津：天津科学技术出版社‚2001．345．

［6］　Manthous CA‚Hall JB‚Samsel RW．Endotoxin in human disease‚part2：Biologic effect and clinical evaluation of anti－endotoxin therapies ［J］．Chest‚1993‚104：1872．

［7］　Ward PA‚Till GO‚Hatherill JT‚et al．Systemic complement activation lunginjury and products of lipid peroxidation［J］．J Clin Invest‚1985‚76（2）：571．

［8］　Ward PA‚Tohson KJ‚Till GP‚et al．Animal models of oxidant lung injury［J］．Respiration‚1986‚50（14）：5－12．

［9］　周志锦．肉苁蓉研究进展［J］．中医药信息‚1995‚16（5）：28－30．