第二章 苯乙醇苷类与多糖定性分析

肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）为列当科多年寄生植物，具有补肾壮阳，润肠通便，延缓衰老，消除疲劳，提高免疫力，保肝护肝等功效，被载入《中华本草》、《中国药典》等医药名录。肉苁蓉在内蒙古、新疆、宁夏等地均有分布，其主要有效成分为苯乙醇苷类和多糖成分。

检索近4年苯乙醇苷类含量检测的相关文献可知，研究人员均采用HPLC、UPLC或与质谱联用建立色谱条件，色谱条件会依据药物性质、仪器性能等因素作出相应调整，建立HPLC、UPLC色谱条件对苯乙醇苷类进行定性定量分析已成为一种成熟的技术手段。本文通过建立UPLC色谱条件，初步对不同产地肉苁蓉的苯乙醇苷类进行定性分析：运用MALLS4法测定其多糖分子量与分布，同时运用离子色谱法测定其单糖与糖醛酸，从3方面初步考察肉苁蓉的内在质量并比较其差异，为肉苁蓉的科学开发与种植提供参考依据。

1 材料

1.1 药材

收集不同产地肉苁蓉，经中国医学科学院药用植物研究所副研究员徐荣鉴定为荒漠肉苁蓉（Cistanche deserticola Y．C．Ma）干燥带鳞叶的肉质茎，药材详细信息见表2-1。

表2-1 样品详细信息

1.2 仪器与分析

1.2.1 仪器

Acquity UPLCTM system(Waters Corp.,USA);

DIONEX ICS-3000 USA（美国戴安公司）；

多角度激光检测器（Wyatt Technology DAWN EOS）（18角度）；

METTLER-AB135十万分之一电子分析天平（METTER-TOLEDO，Switzerland）：

RE-2000A 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；

KQ-250DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；

Milli-Q Advantage A10 超纯水系统（美国密里博公司）。

1.2.2 试剂

乙腈：色谱纯（Honeywell Burdick＆Jackson，USA）：

甲酸：色谱纯（Dikma Technologies Inc.，Beijing）；

屈臣氏饮用水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）；

氯化钠（国药集团化学试剂有限公司，批号：20160706）；

氢氧化钠（Sigma-Aldrich，批号：STBD9065V）；

无水乙酸钠（Sigma-Aldrich，批号：H1608071）：

三氟乙酸（天津市光复精细化工研究所）；

超纯水，其他试剂均为分析纯常规试剂。

1.2.3 中药对照品

松果菊苷（纯度：98.88％，批号：MUST-17030701）；

2＇-乙酰毛蕊花糖苷（纯度：99.28％，批号：MUST-17031504）；

管花苷A（纯度：98.57％，批号：MUST-16080111）；

毛蕊花糖苷（纯度：99.57％，批号：MUST-17020715）；

异毛蕊花糖苷（纯度：99.77％，批号：MUST-17041816），均购自成都曼思特生物科技有限公司。

2 方法

2.1 供试品的制备

2.1.170％醇提物及多糖的制备

将不同产地肉苁蓉均用70％乙醇回流提取2次，每次2h，趁热过滤，合并滤液浓缩，真空干燥得到70％醇提物浸膏，备用；药渣用水提取2次，每次2h，趁热过滤，

合并滤液，80％乙醇沉淀得到多糖，备用。

2.1.2 苯乙醇苷类供试液

分别称取上述备用浸膏各30mg，溶于2mL（0.1％甲酸）水-乙腈（9：1），过0.22μm滤膜，得供试品溶液。

2.1.3 多糖供试液

分别称取上述多糖各10mg，溶于0.1M氯化钠溶液，供分子量分析。

2.1.4 单糖水解液［5-7］

分别称取多糖样品10mg于水解管中，加入4mol／L的三氟乙酸4mL，充氮1分钟排出管内空气，旋紧螺旋盖，于120℃水解2h，待冷却后氮气吹干水解液，除去过量的三氟乙酸，加超纯水定容至10mL。稀释相应倍数后，0.2μm滤膜过滤制得。

2.2 色谱条件

2.2.1 UPLC色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC® BEHC18 （2.1mmx100mm，1.7μm）：

流动相：乙腈（A）-0.1％甲酸水（B）；

流速0.3mL／min；进样体积：2μL：

柱温：30℃；

梯度洗脱条件：0min-8min，2％A；8min-16min，12％A；16min-19min，16％A； 19min-22min,16%A-22%A;22min-25min,19%A;25min-30min,19%A-25%A; 30min-32min,25%A:32min-35min,25%A-30%A;35min-38min,30%A-40%A; 38min-40min,40%A-50%A。

2.2.2 离子色谱分析条件

色谱柱：分析柱：Carbo PacTMPA20（3x150mm）；

淋洗液：250mM 氢氧化钠溶液和1M 醋酸钠溶液；流速：0.5mL／min；

进样体积：10μL；柱温：35℃；

检测器：脉冲安培检测器，金电极。

梯度洗脱条件：A为水，B为250mM氢氧化钠溶液，C为1M醋酸钠溶液；0-20min,94%A,6%B,0%C;20-20.1 min,89%A,6%B,5%C;20.1-35 min,74%A, 6%B,20%C;35.1-45 min,20%A,80%B,0%C;45.1-55min,94%A,6%B,0%C。

2.2.3多角度激光光散射仪条件

色谱柱：TSK Gel G4000PWxl；