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注:按出峰时间顺序峰1-5为:松果菊苷、毛蕊花糖苷、管花苷A、异毛蕊花糖苷、2'-乙酰毛蕊花糖苷
图2-1 5种苯乙醇苷类对照品UPLC 图谱
3.1.2 稳定性试验结果
磴口样品在0,7,14,21,28h后5种对照品相对峰面积的RSD值,显示均小于3%(见表2-3),显示样品稳定性良好。
表2-3 稳定性结果
成分 | 峰 | 面积(n-5) | RSD/% | |||
松果菊苷 | 133079 | 133900 | 131700 | 132106 | 132311 | 990 |
毛蕊花糖苷 | 536548 | 543379 | 544187 | 541722 | 538134 | 0.61 |
管花苷A | 1630 | 1586 | 1603 | 1648 | 1668 | 2.04 |
异毛蕊花糖苷 | 57001 | 57912 | 56302 | 57838 | 56875 | 1.19 |
2'-乙酰毛蕊花糖苷 | 53235 | 53065 | 52160 | 52781 | 51492 | 1.37 |
3.1.3 重复性试验结果
平行制备阿克苏沙雅样品5份,计算5种对照品(R1~R5)相对峰面积,RSD值均小于3%(见表2-4),表明样品重现性良好。
表2-4 重复性结果
成分 | 峰 | 面积(n=5) | RSD/% | |||
松果菊苷 | 176123 | 176903 | 175775 | 174677 | 179359 | 0.99 |
毛蕊花糖苷 | 95603 | 95642 | 94868 | 94541 | 97065 | 1.02 |
管花苷A | 19805 | 19793 | 19299 | 19035 | 20166 | 2.29 |
异毛蕊花糖苷 | 9066 | 9777 | 10035 | 9972 | 9791 | 1.13 |
2'-乙酰毛蕊花糖苷 | 88696 | 88117 | 87522 | 87299 | 88610 | 0.71 |
3.2 不同产地肉苁蓉苯乙醇苷类含量定性分析
将不同产地肉苁蓉中松果菊苷、毛蕊花糖苷、管花苷A、异毛蕊花糖苷和2'-乙酰毛蕊花糖苷5种苯乙醇苷峰面积制作成柱状图,结果见图2-3、2-4、2-5。
3.2.1 新疆产地肉苁蓉不同采收季节苯乙醇苷类含量比较
流动相:0.1M氯化钠溶液
流速:0.5mL·min
进样量:200μL
样品浓度:1mg*mL
2.3 苯乙醇苷类定性方法学考察
2.3.1 精密度试验
取且末1样品在2.2.1色谱条件下连续进样6次,以R1~R5为特征峰,计算峰面积及RSD%。
2.3.2 稳定性试验
测定磴口样品在0h,7h,14h,21h,28h后,以R1~R5为特征峰,计算峰面积,及RSD%。
2.3.3 重复性试验
阿克苏沙雅样品平行制备5份,在2.2.1色谱条件下分析,以R1~R5为特征峰计算峰面积,计算RSD%。
3 结果
3.1 苯乙醇苷类定性方法学结果
3.1.1 精密度试验结果
5种对照品UPLC图谱见图2-1,以QM1样品进行精密度试验,结果显示5种对照品相对峰面积的RSD值均小于3%,表明其精密度良好,结果见表2-2。
表2-2 精密度结果
成分 | 峰面积 | (n=6) | RSD/% | ||||
松果菊苷 | 3590306 | 3566946 | 3573561 | 3577564 | 3560687 | 3568021 | 0.29 |
毛蕊花糖苷 | 1056323 | 1053054 | 1063629 | 1062552 | 1061118 | 1061424 | 0.39 |
管花苷A | 161814 | 162677 | 161026 | 159438 | 160290 | 154554 | 1.80 |
异毛蕊花糖苷 | 117880 | 115700 | 116907 | 113817 | 118392 | 111597 | 2.25 |
2'-乙酰毛蕊花糖苷 | 24407 | 24262 | 25082 | 23958 | 23302 | 24633 | 2.50 |
按照表2-1记录,于田2、且末1、且末2为秋季采收,其余产地均为春季采收,5种苯乙醇苷含量分布中,秋季采收含量明显高于春季,这与庞金虎[121等人研究结论相一致。这是由于经过春夏秋的旺盛生长,初秋开始,肉苁蓉地下根茎的营养物质开始积累,有效成分含量增高,且秋季气候低温干燥,有助于药材前处理,所以秋季采收时间为10月下旬至11月上旬。另外,春季采收应在3月下旬至4月上旬,防止抽薹营养物质的消耗。此外,来自于新疆和田博远基地,且末治沙站,阿克苏沙雅的肉苁蓉样品为鲜品,5种苯乙醇苷含量很低,说明药材采收后,干燥过程对有效成分的积累有较大的影响13)。
图2-3 不同采收季节5种苯乙醇苷含量分布柱状图
3.2.2 新疆产地野生与栽培肉苁蓉苯乙醇苷类比较
去除季节因素的影响,下列产地均为春季采收,作图2-4;观察柱形图,所有样品所含5种苯乙醇苷类成分中,主要以松果菊苷和毛蕊花糖苷为主;其中奇台及木垒为野生样品,其余产地均为栽培样品,野生样品峰面积高度明显高于栽培,说明野生生长有助于苯乙醇苷类成分含量的提升。
图2-4野生
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