【摘要】　目的　观察肉苁蓉对小鼠睾丸和附睾的形态学及组织化学的影响。方法　选昆明系雄性小鼠30 只, 随机分为用药Ⅰ 、Ⅱ 组与对照组。用肉苁蓉水煎液( 4g·kg -1·d-1和8g·kg -1·d-1) 灌胃, 对照组用生理盐水灌胃, 三周后处死小鼠, 测定精液中精子数量、活率、运行速度等形态学指标, 以及精浆中果糖含量。组织化学观察睾丸和附睾琥珀酸脱氢酶和非特异性脂酶反应。结果　给药组上述指标均高于对照组。结论　提示肉苁蓉确有壮阳补肾之功效。

【关键词】　肉苁蓉;小鼠;睾丸;附睾;形态学;组织化学

肉苁蓉列为当科植物肉苁蓉( Cistanche Deseriticola)的带鳞片的肉质茎。是一味名贵的补药, 具有补肾、壮阳、强肝肾、益精气等作用[ 1], 肉苁蓉为历代补肾壮阳处方中使用频率最高的药物, 也是著名的补益药物之一, 仅次于人参[ 2] 。为了进一步探讨肉苁蓉的作用机制, 我们对服药组、对照组小鼠进行了睾丸和附睾的形态学及组织化学的观察。

1 　材料和方法

1 .1 　材料

药物:肉苁蓉产于内蒙古阿拉善, 并经内蒙古药检所鉴定, 符合国家药典规定。按生药∶水=100g∶400ml, 先浸泡30min, 加热煮沸后再用温火煎30min,将药液倒出, 按100g∶200ml 比例重煎。将两次的煎液浓缩至相当于每毫升含生药1g 备用。动物:昆明系小白鼠, 雄性, 30 只, 体重25g -30g 。由扬州大学医学院动物中心提供。

1 .2 　方法

实验动物随机分为用药Ⅰ 、Ⅱ组, 每组10 只, 灌胃服肉苁蓉水煎液, 日用量分别为4g/kg 和8g/kg 。对照组( 10 只) 灌胃服同容积生理盐水。每日灌服一次, 连续3 周。末次给药24 小时后, 处死动物。

1 .2 .1 　显微镜观察　取小鼠附睾[ 3], 置于10ml37 ℃生理盐水中, 适当剪碎, 温浴10min, 得精子悬液, 按白血球计数法记录显微镜下所看到的精子密度( D) 、精子活率(A) 、精子畸形率( T) 和精子运行速度( V) 。

1 .2 .2 　果糖含量测定　取小鼠精液采用间苯二酚显色法[ 4], 分光光度计于500nm 波长比色, 用标准果糖经同样处理绘制标准曲线, 测定精液中果糖含量。

1 .2 .3 　组织切片观察　取小鼠睾丸和附睾, 用4 %福尔马林固定, 石蜡包埋、切片、HE 染色, 光镜下观察组织学状况。

1 .2 .4 　组织化学观察　取小鼠睾丸和附睾, 4 %福尔马林固定, 冰冻切片, 观察琥珀酸脱氢酶SDH 、非特异性脂酶NSE 的变化[ 5] 。

2　结果

2 .1 　肉苁蓉对精液中精子密度、活率、运行速度及畸形率的影响

2 .2 　肉苁蓉对小鼠精液中果糖含量的影响

2 .3 　组织形态学观察

对照组:睾丸被膜光滑完整, 生精小管横切面可见精原细胞及不同发育阶段的精母细胞、精子细胞、精子4 ～ 5 层排列有序, 组成多种形态的生精上皮图像。支持细胞可见, 形态正常。睾丸间质中细胞较少, 少数间质细胞呈成纤维细胞样状态, 胞质中空泡增多, 染色浅, 有脂滴和色素积聚。生精小管周围基膜厚约6 ～ 8um( 图1) 。用药组:生精小管界膜完整, 厚约10 ～ 14um, 其间存在有平滑肌样细胞。生精小管外形较规则, 各级生精细胞有序排列, 约6 ～ 8 层。精原细胞位于基底部, 染色质呈细粒状, 染色深, 核中可见1 -2 个浅染区, 核仁明显。初级精母细胞数量增多, 体积大,直径约17um。精子外形呈蝌蚪状, 头朝向基底膜,染色深。睾丸间质细胞成群分布, 数量增多, 血管丰富( 图2) 。

2 .4 　肉苁蓉对小鼠睾丸和附睾的琥珀酸脱氢酶(SDH) 、非特异性脂酶(NSE) 的影响

2 .4 .1 　琥珀酸脱氢酶( SDH) 　各级生精细胞胞质中均有SDH 反应, 其中以精原细胞较强, 间质细胞的反应极强( 表3) 。附睾管上皮细胞内SDH 阳性颗粒散在分布, 以核上区较多( 见图3 、4) 。用药组SDH 反应强于对照组( 见图4) 。

2 .4 .2 　非特异性脂酶( NSE) 　睾丸和附睾均有阳性反应颗粒, 尤以睾丸间质细胞和支持细胞呈强阳性。用药组附睾管上皮细胞基底面阳性颗粒增多( 见图5 、6, 见表3) 。

3　讨论

本实验用肉苁蓉水煎液, 分别以4g/kg 和8g/kg灌胃雄性小鼠2 ～ 3 周后, 小鼠精子数量、活率明显增多, 精子运行速度增快, 而精子畸形率有所下降。组织形态学观察, 用药组睾丸生精功能增强, 附睾管的微环境得到改善, 果糖含量增加。组织化学研究表明, SDH 、NSE 反应呈强阳性。

精子发生是一个多时相的复杂过程, 其中包括精原细胞的有丝分裂、精母细胞的成熟分裂和精子细胞的变态三个阶段。每个阶段均有其特殊的代谢类型。生精小管中各级生精细胞的分裂和精子发生需要足够的营养物质及内分泌激素的调节。祖国传统医学认为, 肉苁蓉具有较好的补肾壮阳作用, 则可呈现雄性激素和促性腺激素样作用, 以调节内分泌腺轴的功能[ 6] 。雄激素是精子发生过程中必不可少的激素。附睾是精子进一步成熟发育和分化的微环境, 精子在此过程中依赖于附睾上皮的协同作用, 上皮细胞的分泌、吸收和物质转运活动主要是调节管腔内适于精子发育和分化以及储存和静息的微环境。精浆中果糖的含量是反映附睾功能的重要成份, 用药组果糖含量明显高于对照组。SDH 属于琥珀酸氧化酶系统的酶, 在线粒体内排列成链, SDH 是此系统的第一个酶, 存在于所有有氧呼吸的细胞内,和线粒体膜牢固结合, 是脱氢酶中最重要的酶, 在组化反应中常用来反映三羧酸循环的情况而成为标志酶。NSE 活性与胆固醇的水解和甾体合成有关, 常用来衡量睾丸间质细胞的机能[ 7] 。用药组睾丸和附睾中SDH 、NSE 强阳性反应的药物数明显高于对照组, 证明肉苁蓉确能促进睾丸生精功能、改善附睾的微环境。为肉苁蓉补肾壮阳作用的机理提供了可靠的形态学依据。

参　考　文　献

1 .李时珍.本草纲目.北京:人民卫生出版社, 1977 :727～ 728 .

2 .黄保民, 李新吾.抗老益寿古方药物研析.湖南中医学院学报, 1987;2( 7) :1～ 2.

3 .李仪奎主编.中药药理实验方法学.上海:上海科技出版社, 509～ 511.

4.罗建华主编.不孕症实验诊断技术.学林出版社, 1994:44～ 46 .

5.陈啸梅.组织化学手册.北京:人民卫生出版社, 1982 :130,224 .

6.何伟, 舒小奋, 宗桂珍.肉苁蓉炮制前后补肾壮阳作用研究.中国中药杂志, 1996 ;21( 9) :534～ 539.

7.王一飞, 吴竟梅, 仇一玄.衡量间质细胞机能的组织化学指标.细胞生物学杂志, 1980;2( 4) :27～ 30.