宋玉霞，郭生虎，张芦燕，李“苗，马洪爱，牛东玲一，郑国琦，王英华”

1．宁夏农业生物技术重点试验室，宁夏 银川 750002；

2．宁夏大学生命科学学院，宁夏 银川 750021，

3．宁夏药品检验所，宁夏 银川 750004

摘 要：目的 为扩大和提高肉苁蓉Cistanche deserticola 资源的利用效率，方法 以肉苁蓉肉质茎的不同组织部位作为外植体，采用正交实验方法，筛选诱导愈伤组织产生的不同培养基和培养条件，并继代培养，应用HPLC方法对愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷（毛蕊花糖苷）的量进行测定。结果 肉苁蓉肉质茎的维管组织部分是诱导愈伤组织的最适外植体，鳞片叶次之，髓组织部分请导效果较差。在暗培养，25～27℃条件下以B5为基本培养基附加6-BA（0.5～2mg／L）与IAA（0.5～1.5mg／L）诱导愈伤组织效果最佳：在半光照（光培养10h／d．暗培养14h／山）条件下，愈伤组织生长正常，最佳继代时间为25～30d，愈伤组织培养物中松果菊苷和洋丁香苷（毛蕊花糖苷）达4.37％。结论 筛选出了适宜的肉苁蓉愈伤组织培养方法，且培养物中主要药用有效成分松果菊苷和洋丁香苷（毛蕊花糖苷）的量达到并超过了《中国药典》要求（0.3％）的标准。

关键词：肉苁蓉：肉质茎：愈伤组织：洋丁香苷（毛蕊花糖苷）；松果菊苷

肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma为列当 科肉苁蓉属多年生寄生草本植物，具肉质茎，属珍稀药用植物，生长在干旱荒漠中。内含生物碱、黄酮类、苯乙基糖苷、环烯醚萜苷等多种活性成分，药用价值很大。肉苁蓉具有补肾、益精、润肠、提高人体免疫功能、抗衰老、抗疲劳等多种功能。多年来人们利用的肉苁蓉全部为天然资源，由于市场需求量日益增大，造成滥采乱挖严重。另外，肉苁蓉生长环境十分恶劣，并具有独特的寄生生物学特性，野生资源严重匮乏，成为濒危植物。为扩大和保护野生资源，人们开始从多种途径解决肉苁蓉的繁殖问题，进行了人工栽培研究，并有成功报道，但由于技术局限性较大，推广应用还存在一些问题。利用组织培养技术，诱导愈伤组织，提取药用活性成分的方法在许多药用植物研究方面被采用。对肉苁蓉这类资源少、难繁殖的药用植物采用愈伤组织培养技术提取药用活性成分的研究更加重要。国内对肉苁蓉愈伤组织的诱导研究有过研究报道，但对肉苁蓉愈伤组织物质中毛蕊花糖苷与松果菊苷定量测定的报道较少。本试验对肉苁蓉的肉质茎进行了系统的愈伤组织诱导和培养研究，并按照2005年版《中国药典》一部的方法和标准，对其主要药用有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷的量进行了测定，为利用愈伤组织提取药用活性成分奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料：试验材料肉苁蓉C，deserticola Y．C．Ma肉质茎采自内蒙古阿拉善左旗苏海图苏木乌兰布和沙漠中（标本由宁夏大学马德滋教授鉴定）。

1.2 方法

1.2.1 外植体处理：肉苁蓉的肉质茎共有3个部分构成：茎外部覆瓦状排列的鳞片叶；维管束呈环状排列的维管组织部分：中心的髓组织部分。将肉苁蓉肉质茎用自来水和蒸馏水反复冲洗干净后，分成3个部分：鳞片叶、维管组织、髓组织作为诱导愈伤组织的外植体。在超净工作台上，先用70％乙醇浸泡1min，再用0.1％升汞浸泡9min，然后再用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸干表面水分，分别切成0.5cmx0.5cmx0.3cm的小块，接种到不同的诱导培养基上。

1.2.2 愈伤组织诱导和培养条件：实验所选择的基本培养基为MS、B5培养基，附加植物激素（2,4-D；6-BA：NAA等），培养基中加蔗糖30g，琼脂5.5g／L．培养基的pH值为5.8。在暗培养条件下诱导愈伤组织，培养温度为25～27℃，在半光照条件下（光照10h／d），进行愈伤组织继代培养，光照强度为1500～20001x，结合自然光照800k左右。采用正交实验方法，应用正交表L（3），对各因素进行了3个水平试验筛选，见表1、2。

表1 植物激素正交实验因素水平表

Table 1 Factors and levels of orthogonal test of plant hormones

表2 植物激素与培养条件正交实验因素水平表

Table 2 Factors and levels of orthogonal test of plant hormones and culture condition