2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Waters HSS T3（100mmx2.1mm，1.8μm）柱；流动相：甲醇（A）-0.1％甲酸溶液（B），梯度洗脱（0～4min，34％A；4～10min，34％～40% A;10~15min,40%~46%A;15~17 min,46%~ 34％A；17～20min，34％A），流速为0.3mL／min；检测波长为330mm；柱温为30℃；进样量为1山。

2.2 对照品溶液的制备 取松果菊苷、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2＇-乙酰金石蚕苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，制成每1mL分别含0.196、0.234、0.228、0.213、0.590、 0.357mg的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取干燥肉苁蓉、德赢vwin登录 、沙苁蓉样品粉末（过65目筛）0.5g，精密称定，置于50ml具塞锥形瓶中，加70％甲醇25mL，称重，超声（250 W，40kHz）30min，放冷，补重，滤过，取续滤液3mL，置于10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0.22μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验：取同一肉苁蓉供试品溶液（RCR10），按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，以5号毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰（S），计算得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.17％～0.37％、0.08％～2.98％，表明仪器精密度良好。

2.4.2 稳定性试验：取同一肉苁蓉供试品溶液（RCR10），分别于0、2、4、8、12、16、20、24、28h，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以5号毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰（S），计算得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.06％～0.60％、0.10％～3.35％，表明供试品溶液在28h内稳定性良好。

2.4.3 重复性试验：取同一批肉苁蓉供试品（RCR10）6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，以5号毛蕊花糖苷色谱峰为参照峰（S），计算得到各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别为0.06％～0.12％、0.15％～3.14％，表明该方法重复性良好。2.5 指纹图谱分析及相似度评价

2.5.1 指纹图谱的建立：取15批肉苁蓉、10批德赢vwin登录 、13批沙苁蓉样品适量，按“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，将数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”，分别以RCR1、GHI、SCR1为参照图谱，以0.1的时间窗宽度进行峰匹配，得到肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉的UPLC叠加图谱，采用平均数法生成对照图谱（R），见图1．肉苁蓉、德赢vwin登录 、沙苁蓉样品指纹图谱分别有9、6、6个共有峰。通过与对照品（图2）比对，确定色谱峰1为松果菊苷，4为管花苷A，5为毛蕊花糖苷，6为异毛蕊花糖苷，10为金石蚕苷，13为2-乙酰金石蚕苷。

2.5.2 相似度评价：肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉样品与各自对照图谱之间的相似度评价结果见表2。15批肉苁蓉样品指纹图谱的相似度均≥0.843，10批德赢vwin登录 样品指纹图谱的相似度均≥0.751,13批沙苁蓉样品指纹图谱的相似度均≥0.749。将肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉对照图谱导人“中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）”，计算肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉对照图谱间的相似度，肉苁蓉与德赢vwin登录 具有较高的相似度，为0.932，面沙苁蓉与德赢vwin登录 的相似度很低，仅有0.070，与肉苁蓉的相似度更低，只有0.045。

2.6 化学计量学分析

2.6.1 主成分分析：将肉苁蓉及德赢vwin登录 样品指纹图谱中共有峰的峰面积导入SIMCA-P 13.0软件，进行主成分分析，提取前2个主成分使样品的多维数据转化成二维数据，得到主成分分析得分图，见图3。肉苁蓉与德赢vwin登录 样品可区分开。

2.6.2 正交偏最小二乘判别分析：为了进一步区分肉苁蓉及德赢vwin登录 样品，在无监督的主成分分析的基础上，进行有监督的正交偏最小二乘判别分析，获得相应的模型。累积解析能力参数R2x和R2Y分别为0.852和0.823，预测能力参数Q2为0.810，说明所建立模型具有较好的解析能力和预测能力，可用于苁蓉与德赢vwin登录 样品的区分。由正交偏最小二乘判别分析得分图（图4）可知，肉苁蓉与德赢vwin登录 样品可区分开。对肉苁蓉及德赢vwin登录 样品的数据差异性进行整体分析，得到变量权重重要性排序预测值（VIP），见图5。以VIP＞1为提取标准，得到肉苁蓉与德赢vwin登录 的差异性标志物分别为色谱峰1（松果菊苷）、7～9、4（管花苷A），可作为区分肉苁蓉与德赢vwin登录 的指标性成分。

3 讨论

肉苁蓉样品指纹图谱有9个共有峰，德赢vwin登录 样品指纹图谱有6个共有峰，二者均指认了松果菊苷、管花苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷4个成分；沙苁蓉样品指纹图谱有6个共有峰，指认了毛蕊花糖苷、金石蚕苷、2＇-乙酰金石蚕苷3个成分。肉苁蓉、德赢vwin登录 、沙苁蓉样品与其各自对照图谱相似度分别为0.843～0.995,0.751～0.999,0.749～

0.999，说明肉苁蓉饮片的内在质量相对较稳定，而德赢vwin登录 、沙苁蓉各批次之间差异较大，这可能是由于产地、采收、加工及储存方式等不同造成药材批间的明显差异。

比较分析肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉对照图谱可知，毛蕊花糖苷是肉苁蓉和德赢vwin登录 的第2大色谱峰，同样也是沙苁蓉的共有峰；管花苷A、异毛蕊花糖苷是肉苁蓉和德赢vwin登录 中含量相对较低的共有峰，而沙苁蓉中没有此色谱峰；沙苁蓉的特征峰分别是金石蚕苷、2＇-乙酰金石蚕苷。由此可见这些指纹特征均很显著，可用于肉苁蓉、德赢vwin登录 及沙苁蓉样品的种间鉴别。