马建玲，陶大勇

（1．新疆库尔勒市动物防疫监督站，新疆库尔勒 841000：2：塔里木大学动物科学学院，新疆阿拉尔 843300）

摘要：肉苁蓉化学成分复杂，有多种活性作用。本试验利用超声波协助提取、酸提取、醇提取方法提取肉苁蓉生物碱，分刷对小鼠进行灌胃给药，观察内苁蓉提取物对小鼠性激素分泌的影响。结果显示，乙醇提取方法得率最高，肉苁蓉提取物能显著提高小鼠雄激素含量（P＜0.05）。

关键词：肉苁蓉；提取物；性激素：雄性小鼠

中图分类号：5853.74     文献标志码：A  文章编号：1000-6354（2014）04-0043-03

DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2014.04.014

肉苁蓉（Herba Cistanches）属列当科（Orobanchaceae）多 年生高等寄生植物，又名苁蓉、大芸、金笋、地精，是我国名贵中药，主要生长在我国沙漠地带，被誉为“沙漠人参”，肉苁蓉具有补肾壮阳、填精补髓、养血润燥、悦色延年等功效，主治男子阳痿、女子不孕、带下、血前、腰膝冷痛、血枯便秘等症。

日前，人们已经从肉苁蓉中分离鉴定出40余种成分，主要的生物活性成分是苯乙醇苷类化合物（PEC）、多糖、生物碱中，肉苁蓉苯乙醇苷粗提取物中除苯乙醇化合外，还含有大量的脂质、鞣质、色素以及无机盐类等，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、增强记忆、助阳等作用中，近年来，国内外学者已对肉苁蓉的形态学、生理学、植物成分功能及人工栽培等方面进行相关研究，但对动物助阳作用的相关研究报道鲜见，因面。有必要从动物实验角度来分析肉苁蓉的助阳机理。

1 材料与方法

1.1 材料

肉苁蓉由塔里木大学动物科学学院陶大勇教授提供。雄性小白鼠由塔里木大学动物科学学院实验基地提供。

1.2 仪器与药品

KQ-400KDE型高功率数控超声仪：ECH-1型电子控温加热板：旋转蒸发仪RE-52AA：DZF-6051型真空干燥箱：SHB-III型循环水式多用真空泵：T6紫外可见分光光度计：电子分析天平：激素检测试剂盒：阳离子交换树脂：乙醇：HC1：正丁醇：氨水：碘化铋钾试剂；硫酸：吐温-80等。

1.3 提取方法

1.3.1 超声波协助提取法 称取500g肉苁蓉筛选后样品，放入5L广口瓶中，分2次加入2000ml蒸馏水，每次1000L，浸泡1h后置于超声仪中超声提取。温度设定为20℃，时间为20min。将提取液置于真空泵中抽滤，将提取的2000ml提取液置加热板上，190℃加热浓缩到200mL以内。将浓缩后的提取液置500mL分液漏斗中，用等量正丁醇萃取，每隔3h更换一次萃取液，反复5次。将正丁醇回收，在500mL分液漏斗中加入200mL回收正丁醇和200ml硫酸，3h更换一次液体，反复5次。将萃取后的下层液体分装3个小烧杯中，置电子控温加热板上，70℃蒸干，备用。

1.3.2 酸提取法 称取500g肉苁蓉筛选后样品放入5L广口瓶中，加入1000ml0.1mol的HC中浸泡24h，真空泵中抽滤。再加入1000ml．0.1mol的HC1浸泡24h，抽滤。

将酸浸泡过的滤液经阳离子交换柯脂处理。先将浸泡液用1mol氨水洗涤至碱性，再用蒸馏水洗涤至中性，后用0.1 mol 盐酸洗涤至酸性（用pH试纸测定）。最后用1mol的氨水清洗，待清洗液为碱性时用试管接取清洗液，每盛一试管即取出一滴滴在薄层层析用的硅胶板上，再加一滴碘化锦钾试剂、持出现红色晕圈时开始收集，直到晕圈消失为止。把收集到的液体分装到5个小烧杯中，置于真空干燥箱中，70℃真空干燥，备用。

1.3.3 醇提取法 称取筛选后肉苁蓉样品500g，放入5L广口瓶中，加入2000ml75％乙醇，分3次浸泡24h，于循环水式多用真空泵中抽滤。将滤液于旋转蒸发仪中，温度65℃，蒸发12h。再把提取液置循环水式多用真空泵中抽滤。滤液放入旋转蒸发仪中蒸发，转速设定为30t／min。温度60℃例，将剩余液体分装3个平腿，置真空干燥箱中．70℃真空干燥，备用。

1.4 动物分组及用药

随机选取健康雄性小白鼠16只，随机分成4组，每组4只。第1组为对照组，其余3组为试验组，将3种不同提取方法提取的生物碱溶于100ml蒸馏水中，用吐温-80助溶，其中对照组用蒸馏水，第2组用超声波协助提取物，第3组用酸提取物，第4组用醇提取物。试验组和对照组均灌胃给药，早晚各1次，每次0.5ml。小鼠自由活动，自由采食，自由饮水。连续给药4周。

1.5 米血

用药4周后，对照组和试验组小鼠眼球采血，分别放入4个5mL离心管中，3000shmin离心10mim。吸取血清。随即用激素检测试剂盒进行检测。

1.6 小鼠质量及活力现察

在实验初期和末期分别逐只称重观察小鼠质量变化，每天饲喂时观察小鼠行为变化。

1.7 小鼠性激素水平测定方法

本试剂盒应用双抗体夹心法测定祥本中小鼠性激素水平。用纯化的小鼠性激素抗体包被微孔板，制成固相抗体，向包被单抗的微孔中依次加入ET.FSH、LH激素，再与标记的激素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物品色。在酶的催化下转化成蓝色，井在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的性激素水平呈正相关。用酶标仪在450mm波长处测定吸光度值，计算激素含量。

2 结果及分析

2.1 肉苁蓉生物碱提取率

不同提取方法提取肉苁蓉生物碱结果见表1。从表1可以看出，乙醇浸提法效果最佳。

表1 肉苁蓉生物碱不同提取方法的提取率／％

Table 1 Extract rate of Herba Cistanches alkaloid with different extraction methods/%

2.2 小鼠活力观察

给药前常规喂养，小鼠安静，嗜睡，未出现争抢食物现象。给药后，小鼠活泼好动，争抢食物，一周后采食量、饮水量增加，排类量也随之增加。

2.3 小鼠质量变化

肉苁蓉生物碱处理前后小鼠质量变化结果见表2。

表2 肉苁蓉生物碱处理前后小鼠质量变化／g

Table 2 Mice bodyweight changes before and after treatment/g

注：同列数据右肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。

Nate Date is se efs wih diffeent superript differed significanaly(P<0.05).

从小鼠活力观察和质量变化可以看出，小鼠用药后质量增加明显（P＜0.05），表明肉苁蓉提取物对小鼠机体无明是的毒副作用。

2.4 内苁蓉生物碱对小鼠性激素含量的影响肉苁蓉生物碱对小鼠性激素含量影响结果见表3。

表3 肉苁蓉生物碱对雄性小似性激素水平的影响

Table 3 Effect of Herba Chtanches extract on sex hormone level in male mice

注：同列数据右肩标不同小写字母表示差异显著（P＜0.05）。

Natise Date in ane coln ih diferent auperseript differed wignificanly(Pc0.05)

由表3可见，试验组小鼠雌二醇水平（E）下降明显（P005，皋丸酮（D）、促性腺激素（FSH）水平升高明显（P＜0.05），黄体生成素含量（LH）变化不显著，提示肉苁蓉提取物对雄性小鼠性激素水平有明显影响，主要作用于E，T.FSH。