尹刚 王贵林 余万桂

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1004-745X（2010）03-0463-03

【摘要】目的 研究肉苁蓉提取物对败血症大鼠急性肺损伤（ALI）的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术复制败血症模型，观察肺组织病理学变化，测定ALI1生物学指标。结果生理盐水组肺间质水肿，肺泡腔内可见大量细胞浸润和血浆蛋白渗出，肺血管内皮细胞损伤。肺湿／干重比、肺泡灌洗液中中性粒细胞比例、蛋白含量及肺泡通透指数（LPI）、肺毛细血管通透性（PVP）均显著升高.肺组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、髓过氧化物酶（MPO）均显著升高。上述指标肉苁蓉组均较生理盐水组显著下降，结论 肉苁蓉对败血症大鼠ALI具有良好保护作用，其机制可能是通过抑制中性粒细胞在肺组织的浸润，减少氧自由基对肺组织损伤实现的。

【关键词】败血症 急性肺损伤 肉苁蓉

败血症是临床急危重症，寻求有效治疗药物一直是临床和基础研究的重大难题。败血症的中医病机是正虚邪实，单纯针对机体邪盛采取的攻下疗法是有效治疗措施之一，但仅局限于攻下治疗也难免失之偏颇，重视扶正补虚治疗同等重要。肉苁蓉是传统补益类中药，药理研究证实其具有增强细胞DNA合成率、抗氧自由基等保护功能，笔者实验观察肉苁蓉对败血症肺组织损伤的作用，以求为败血症扶正补虚治疗提供有效探索。

1 材料与方法

1.1 动物 健康雄性SD大鼠40只，体质量200～250g，由华中科技大学实验动物中心提供，质检号：TJLA-2008-167．随机分为3组：生理盐水组8只，1g／mL肉苁蓉组12只，5g／mL肉苁蓉组12只。实验动物分别采用相应药物常规灌胃15d，每日2次（肉苁蓉提取物由本院中药制剂室提供），给药剂量200mg／kg。实验动物均按文献［1］方法在盲肠结扎穿孔后12min采集标本。

1.2 大鼠肺组织学检查 每组取动物肺左叶少许，经10％甲醛固定，石蜡包埋切片，HE染色后，用普通光学显微镜观察，并在此基础上取肺组织制成1m㎡用25％戊二醛溶液固定，然后固定于1％四氧化锇液中，乙醇、丙酮脱水，经Epon81包埋，制备超薄切片后，行铀-铅双重染色，用透射电镜观察。

1.3 大鼠肺组织湿／干重比、肺灌洗液中细胞计数比及蛋白含量测定 开胸取出肺脏，称湿重后置烤箱（80℃）烤至衡重，称干重，计算湿／干重比。另一批大鼠开胸后行肺泡灌洗，灌洗液在显微镜下行细胞计数、细胞分类。考马氏亮蓝法测定蛋白含量，计算肺通透指数（肺泡灌洗液蛋白／血浆蛋白，LPI)

1.5 大鼠肺组织丙二醛（MDA）的测定 采用硫代巴比妥酸（TBA）法甲测定MDA活性。50ml待测标本加4ml 1.67mol／L的硫酸、0.541％磷钨酸，混匀，3000r／min离心10min，沉淀再同上处理1次，然后加1mL双蒸水、1mLTBA溶液，95℃水浴60min，用5mL正丁醇提取，四乙氧基丙烷作为标准品，终浓度为1nmol／L，荧光分光度计于532nm处测定吸光值。

1.6 大鼠肺组织超氧化物歧化酶（SOD）的测定 按文献［4］方法，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性（试剂盒购自南京建成生物工程研究所）。

1.7 大鼠肺组织髓过氧化物酶（MPO）测定 取肺组织于等渗盐水中尽量洗净残血，置于含0.5％十六烷基三甲基溴化铵的磷酸缓冲液（pH6.0）中制成5％的匀浆，按试剂盒说明书操作。

1.8 统计学方法 应用SPSS统计软件，计量资料以（±3）表示，采用：检验和x检验。

2结果

2.1 各组肺组织湿／干重比及肺泡灌洗液中细胞计数比、蛋白含量比较 见表1．生理盐水组肺湿／千重比是著高于肉苁蓉组（P＜0.05或0.01），肉苁蓉组肺泡灌洗液中细胞计数比、蛋白含量明显低于生理盐水组（P＜0.05或0.01），且随着给药质量浓度增加呈现显著降低。

表1 各组大鼠肺组织湿／干重比及肺泡灌洗液中细胞

计数比、蛋白含量的比较（x）

与生理盐水组比较，＊P＜0.01＊＊P＜0.01．下同

2.2 各组大鼠肺组织形态学改变的比较 大体观察：生理盐水组肺脏体积明显增大，呈暗红色，表面可见不同程度充血水肿，边缘部分大量肺梗死灶：肉苁蓉组肺脏呈浅红色，表面轻度充血水肿，未见明显肺梗死灶，光镜观察示，生理盐水组见肺泡、肺间质充血水肿，肺泡腔内大量弥漫性中性粒细胞浸润，部分有脓肿形成，可见不同程度的肺不张、坏死、代偿性肺气肿、血栓及类似透明膜形成。肉苁蓉组上述病变明显减轻。生理盐水组肺泡上皮细胞肿胀，板层小体排空现象明显，形成大空泡，毛细血管内皮细胞肿胀，内皮细胞之间连续损伤，细胞间隙增宽，毛细血管及肺泡基底膜疏松，增宽，不规则增厚，厚薄不均，肉苁蓉组肺泡上皮细胞肿胀不明显，板层小体排空减轻，形成空泡数量少，体积小，毛细血管内皮细胞之间连接接近正常，基底膜轻度疏松，不规则增厚。5g／ml．肉苁蓉组较1g／mL肉苁蓉组肺组织形态学改变范围更小，肺损伤程度更轻。

2.3 各组大鼠LP1和PVP的比较 见表2．生理盐水组LPI和PVP明显高于肉苁蓉组（P＜0.05或0.01），肉苁蓉组LPI和PVP降低，具有显著量效关系。

2.4 各组大鼠肺组织MDA．SOD．MPO活性的比较 见表3．生理盐水组肺组织中MDA含量显著高于肉苁蓉组，而肉苁蓉组肺组织中SOD活性和MPO活性显著增高（P＜0.05或0.01）。

表2 各组大鼠LPI和PVP比较（±）

表3 各组大鼠肺组织MDA.SOD、MPO活性比较（至±x）

3讨论

多器官衰竭是败血症后期病情不可逆转和死亡率本原因川，保护器官功能对降低败血症临床高死亡率具有重要意义。肺作为多器官衰竭的首发器官，1／3败血症患者死于急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合症（ARDS）。AL1的主要病理生理机制是大量中性粒细胞在肺组织内聚集和活化，并与血管内皮细胞黏附的同时，转移单电子的还原型辅酶目氧化酶浓度增高而引起呼吸爆发，产生大量氧自由基，通过较强的氧化作用引起细胞膜和膜性结构的损害和功能障碍1。脂质过氧化物反映组织中氧自由基的变化，与肺损伤的程度有直接的量相关口。在机体的酶与非酶抗自由基氧化系统中，SOD的活性与组织损伤度保持良好的相关性m。肉苁蓉组MDA和SOD活性与生理盐水组比较，差异有统计学意义。肉苁蓉具有增强免疫功能，抗衰老，增强细胞DNA 合成率等作用、实验结果表明，肉苁蓉组肺系数、PLT、肺泡灌洗液中性粒细胞比例，肺血管通通性均显著下降，肺组织MDA活性下降、SOD是著上升，MPO活性下降，同时形态学观察发现肺组织损伤程度明显减轻，中性粒细胞浸润减少，且5g／mL肉苁蓉组较1g／mL肉苁蓉组肺损伤程度更轻，存在良好的量效关系。提示肉苁蓉对ALI具有较显著的保护作用。其机制可能为：（1）抑制炎性细胞肺内迁移，减少中性粒细胞等被激活产生的氧自由基，使生物膜得到保护：（2）促进核酸和蛋白质合成，对肺损伤具有保护作用：（3）增强吞噬细胞免疫功能，减轻内毒素造成的肺组织损伤，该实验结果为临床败血症急性肺损伤扶正补虚治疗提供了实验基础。

参考文献

111 金惠铭，自肠结扎穿孔术后的收血症模型IJ1，中国病理生理杂志，1990.6（2）：126-127．

121 Zhu WG-Me Callm MO-Levine BAet al. Role of platelet activating factor in panereiltis associated acute lng injry in the rat[].A Pathol:1992-140:971-979.

131 汪谦，朱晓峰，赵西龙，现代医学实验方法［M］，北京：人民卫生出版社，2007：508．

[4] 张秀明，李健斋，魏明竞，现代临床生化检验学［M］.北京：人民军医出版社，2008：896

罗正曜，体克学［M］天津：天津科学技术出版社，2008：345．