王英姿＇，张超，贺葵邦

（1．北京中医药大学，北京100102：2．山东中医药大学，山东 济南 250355）

摘要：目的 选择肉苁蓉的提取工艺。方法 以松果菊苷、β-谷甾醇、总糖及干浸膏得率为指标，在药材粒度、药材量、滤过、浓缩等条件相同的前提下，采用超声提取法（USE）、絮凝水提法（WFE）、醇提法（AE）3种方法进行比较研究。结果4个指标综合评价Y 值顺序为：Ye＞Y＞Yesx。结论 肉苁蓉提取工艺以絮凝水提法为优。

关键词：肉苁蓉；提取方法：综合指标

Optimizing of Cistanche desertiola extract technology

WANG Ying-zi',ZHANG Chao',HE Kui-bang'

(1.Bei jing University of TCM,Bei jing 100102:2.Shandong University of TCM,Jinan Shandong 250355)

ABSTRACT:OBJECTIVE To evaluate the extract technology of Herba Cistcoanchis components.METHODS Three extractionmethods of the ultrasound extraction(USE), the water flocculation extraction(WFE),the alcohol extraction(AE) were evaluated and compared with echinacoside,β-sitosterol,total saccharine and dried extract weight as the indexes under the same conditions of drug granularity, solvent amount, filtration,concentration and so on.RESULTS Comprehensive evaluation of Y value was as follows:Ym>Yu>Ysx.CONCLUSION The WFE method proved to be better than the other two methods in the extraction of Herba Cistcoanchis.

KEY WORDS:Cistanche desertiola:extract technology:comprehensive index

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanche deserticolaY.C.Ma）或德赢vwin登录 （Cistanchetubulosa（Schrenk）Wight）的干燥带鳞叶的肉质茎。具有补肾阳、益精血、润肠通便等功效，是传统的名贵补益类中药，也是我国第一批珍稀濒危植物（属国家二级保护植物），因此得到国际环境保护组织、野生动植物保护组织和我国政府的重视。为了更好地开发利用这一珍贵的资源，促进肉苁蓉产业和西部地区经济发展，其提取工艺研究值得深入探讨。超声提取法、水提絮凝沉淀法和醇提法这3种提取工艺操作过程都相对简单，在制药企业中大规模生产有一定的可行性，故本文对这3种提取法进行综合评价，优选出提取效率较高的一种工艺，为肉苁蓉质量标准规范化研究及工业生产起到参考作用。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（HP1100系列，美国Agilent公司）：MA110型电子分析天平（上海第二天平仪器厂）：721-100型分光光度计（上海第三分析仪器厂）：CS-930型薄层扫描仪（日本·岛津）：LXJ-II型离心沉淀机（上海医疗器械三厂）：KQ2200 型超声仪（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药

肉苁蓉购自北京同仁堂药店，经北京中医药大学阎玉凝教授鉴定，为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y．C．Ma．的带鳞叶的干燥肉质茎。松果菊苷对照品（111670-200502）、D-无水葡萄糖（118033-200503）对照品购自中国药品生物制品检定所：β-谷甾醇（S-5753 Lot 104H 0726）购自日本SIGMA ChemicalCo．；壳聚糖购自山东奥康生物科技有限公司：甲醇、乙腈为色谱纯（天津四友公司）；水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1 样品液的制备

2.1.1超声提取法（the ultrasound extraction，USE）将药材粉碎，称取肉苁蓉粉末30g，用体积分数75％的乙醇100mL浸泡过夜，于35 kHz超声提取2次，每次30 min，滤过。滤渣加水100mL超声提取30min，滤过：再加水100mL重复超声提取1次，合并2次提取液，浓缩定容洗至250mL量瓶中，定容，摇匀成为USE 液。

2.1.2 絮凝水提法（the water flocculation extraction，WFE）取30g粉碎后的肉苁蓉用去离子水浸泡1h，煎煮3次。第一煎用水300mL，煮沸150min；第二煎用水180mL，煮沸75min：第三煎加水180mL，煮沸75min。合并煎煮液，冷却后过滤，将滤液浓缩至150mL。将水提液于温度70～75℃下，缓慢加入壳聚糖溶液，使其含量为0.30％（预实验已经过优选）。边加边搅拌，全部加入后，继续搅拌1min，静置。取上清液，转移至250mL量瓶中，定容，摇匀成为WFE 液。

2.1.3醇提法（the alcohol extraction，AE）精密称取粉碎后的肉苁蓉30g，置烧瓶中，用75％乙醇10、6、6倍量提取，时间150min、75min、75 min，回收乙醇，药液离心、浓缩并定容至250mL，即得AE液。

2.2 供试品溶液制备

2.2.1精密量取2.1项下样品液各25mL，置水浴上蒸至近干，残渣加水10mL使溶解，放冷，通过D-101-I型大孔树脂柱（柱长20cm，内径2cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用体积分数20％乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继用体积分数70％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，精密量取0.5mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得3种供试液，供测定松果菊苷含量。

2.2.2精密量取2.1项下样品液各100mL，分别浓缩至流膏状，加硅藻土3g，混匀，105℃烘干，研匀，用石油醚100mL索氏回流提取2h，提取液回收石油醚至干，残留物以氯仿溶解并定容至2mL，即得3种供试液（每1mL相当于原药材6g），供测定β-谷甾醇含量。

2.2.3 精密量取2.1项下样品液各2.0mL，分别加乙醇17.0mL，静置冷藏24h，布氏漏斗抽滤，滤渣以适量蒸馏水溶解，滤过，加蒸馏水定容于100mL 容量瓶中，即得3 种供试液

2.5.5回收率试验 精密吸取对照品液7 uL，加入已测得β-谷甾醇含量的AE液5 uL，按2.5.1项下方法展开测定含量，结果回收率为98.16％。

2.6总糖的含量测定

2.6.1 标准曲线的制备 精取2.3.3 项下对照液C 0.20、0.40、0.60、0.80、1.0、1.2mL，分别置于干燥具塞试管中，补加蒸馏水使成2.0mL，分别加入葱酮试剂4mL（精密称取蒽酮

0.12g，用浓硫酸10mL 溶解并定容至100mL，冷至室温，即得），混匀。以蒸馏水2.0mL加蒽酮试剂4mL为随行空白，在625nm处测定吸收度。以葡萄糖量为横坐标，吸收度为纵坐标作图，得一条不过原点的直线。葡萄糖的量在0.02～0.10mg 范围内与吸收度呈良好的线性关系，回归方程：Y＝6.84X＋0.018 3，Y＝0.999 1（n＝6）。

2.6.2 精密度试验 精密吸取对照液C0.80mL，分别放入5个具塞试管中，按2.6.1项下方法测其吸收度，RSD 为0.510％（n＝5）。

2.6.3 稳定性试验 精密吸取对照液C 0.80mL，按2.6.1项下方法测其吸收度，并每隔15min 测定1次，结果吸收度在90min 内稳定，RSD 为0.310％（n＝7）。

2.6.4 含量测定 精取2.2.3项下供试液C各0.50mL，按2.6.1项下方法自“分别置于干燥具塞试管中”起，依法测定，结果见表1。

2.6.5回收率试验 精密吸取对照液1.0mL，加入已测得葡萄糖含量的WFE 液0.2mL中，混匀，按2.6.1项下方法测定含量，回收率为98.61％。

2.7干浸膏得率 精取2.1项下样品液各10.0mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘3h，移至干燥器中，冷却30min，即刻精密称重，计算干浸膏量。结果见表1。

2.8 3 种方法提取液指标成分的综合评价 将2.4～2.7项下3种提取液的松果菊苷、β-谷甾醇、总糖、干浸膏得率4个指标的数据，按公式X＝（x，-X，）／s，进行标准化处理。X，为标准化后的值，X，为样品液冲成分的含量，X，为样品中种成分的平均值，S，为成分的标准差。根据各指标在提取工艺选择中的主次地位，给予不同的加权系数，以标准化后的值X，加权后求和，即得综合评价值，其关系式：Y＝（松果菊苷＋β-谷甾醇＋总糖）／3x8＋干浸膏x2，结果见表2．其大小顺序为：Ym＞Yu＞Ya。结果见表1。

表13种方法提取液各指标成分含量及标准化结果比较（n＝3）

Tab.1 Results of three differentextract technology indicators and

standardization of ingredients(n=3)

C（每1mL相当于原药材0.0024g），供测定总糖含量。

2.3 对照品溶液的制备

2.3.1精密称取干燥至恒重的松果菊苷对照品10.00mg，用甲醇定容至10mL，即得对照液A。

2.3.2 精密称取β-谷甾醇2.00mg 用氯仿定容至2mL，即得对照液B。

2.3.3 精密称取干燥至恒重的葡萄糖5.00mg用蒸馏水溶解并定容至50mL，即得对照液C。

2.4松果菊苷含量测定

2.4.1 标准曲线的制备

色谱条件 色谱柱：Phenomenex Kromasio Ca色谱柱（250mmx4.6mm，5μm）；检测波长：330mm；柱温：30℃；流速：1mL·min：流动相：甲醇-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱。精密量取对照品溶液5,10,15,20,25,30uL进样，按上述高效液相色谱条件进行测定。以松果菊苷进样量为横坐标，测得的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，并计算回归方程。所得回归方程为Y＝0.022 5X＋0.0156（r＝0.999 9），线性范围为5～30ug。

2.4.2精密度试验 取一定浓度对照品溶液连续测定5次，测定含量，其RSD为0.54％，表明仪器精密度良好。

2.4.3稳定性试验 取对照品溶液于室温放置0,1,2,3,4和5h测定含量，RSD为2.50％，表明对照品溶液在5h内稳定。

2.4.4回收率试验 精密吸取对照品液10uL，加入已测得松果菊苷含量的USE液5 uL，按

2.4.1项下方法展开测定含量，平均回收率99.6％，RSD为0.8％（n＝5）。

2.4.5样品测定 取2.2项下供试品溶液，进行含量测定，结果见表1。

2.5 β-谷甾醇的含量测定

2.5.1 标准曲线的制备薄层扫描条件：入S＝395nm，λR＝435nm；灵敏度中；SX＝3；狭缝1.20mmx1.20mm：双波长反射式锯齿形扫描。

标准曲线的制备：0.3％ CMC-Na-硅胶G 板，分别点对照液A 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、14.0 uL，用甲苯-乙酸乙酯（4：1）展开15cm，挥干溶剂，喷10％硫酸乙醇，105℃烘3 min 显色，扫描。以点样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一条不过原点的直线。β-谷甾醇在2.0～14.0μg范围内点样量与峰面积呈良好的线性关系。回归方程：Y＝1552.8X+147.14,Y=0.999 2.

2.5.2 精密度试验 精密吸取对照品液B9.0μL，点于同一块CMC-Na-硅胶G 板上，共点5个点，依2.5.1项下方法展开，显色定位，扫描，RSD 为3.688％（n＝5）。

2.5.3 稳定性试验 将上述薄层板选择1个点立即测定，并每隔30min 扫描1次，面积积分值在120 min内稳定，RSD为2.325％（n＝5）。

2.5.4 含量测定 精密量取2.2.1项下供试液各30.0uL，2.3.2项下β-谷甾醇对照液4.0、10.0 μL，分别点于同一块薄层扫描板上，按2.5.1项下方法展开，显色，扫描。