摘要:目的　研究肉苁蓉(CistanchedeserticolaY.C.Ma)的化学成分。方法　采用多种色谱方法进行分离, 利用光谱数据结合理化分析进行结构鉴定。结果　从肉苁蓉干燥肉质茎70%乙醇提取物中, 分离鉴定了17个化合物。分别为毛蕊花糖苷(1)、2′-乙酰基毛蕊花糖苷(2)、肉苁蓉苷C(3)、肉苁蓉苷D(4)、异毛蕊花糖苷(5)、管花苷B(6)、管花苷E(7)、盐生肉苁蓉苷D(8)、盐生肉苁蓉苷E(9)、plantainosideC(10)、osmanthusideB6(Z/E)(11a/b)、松果菊苷(12)、8-表马钱子酸(13)和京尼平苷(14)、ononin(15)、尿囊素(16)和半乳糖醇(17)。结论　化合物10、11a/b和15为首次从本属植物中分离得到。化合物7 ～ 9为首次从本种植物中分离得到。

关键词:肉苁蓉;化学成分;苯乙醇苷

肉苁蓉(CistanchedeserticolaY.C.Ma), 又称荒漠肉苁蓉, 为《中国药典》2005版和2010版收载的肉苁蓉的基原植物之一, 也是1985 年版～ 2000年版各版药典收载的肉苁蓉药材的唯一基原植物。具有补肾阳、益精血、润畅通便的功效, 常用于治疗男子阳痿、女子不孕、腰膝冷痛、血枯便秘等症[ 1-3] 。对肉苁蓉的化学成分, 日本学者小林弘美等进行了较系统的研究[ 4-7] , 但其论文是以盐生肉苁蓉[ C.salsa(C.A.Mey)G.Beck]名义发表的, 后经屠鹏

飞等鉴定原植物为肉苁蓉(C.deserticola)[ 8-9] 。我国学者尽管也对肉苁蓉的化学成分有过研究, 但不是很系统和深入[ 8-11] 。因此, 为了进一步阐明肉苁蓉的化学物质基础, 同时为其生物活性和质量控制研究提供化合物, 本实验对荒漠肉苁蓉进行了较为系统的化学成分研究。利用多种色谱技术, 从肉苁蓉干燥肉质茎的70%乙醇提取物中, 分离鉴定了17 个化合物。包括:12个苯乙醇苷类化合物, 分别为毛蕊花糖苷(1)、2′-乙酰基毛蕊花糖苷(2)、肉苁蓉苷C(3)、肉苁蓉苷D (4)、异毛蕊花糖苷(5)、管花苷B(6)、管花苷E(7)、盐生肉苁蓉苷D(8)、盐生肉苁蓉苷E(9)、plantainosideC(10)、osmanthusideB6(Z/E)(11a/b)和松果菊苷(12);2个环烯醚萜苷类化合物:8-表马钱子酸(13)和京尼平苷(14);其他类型化合物3个:芒柄花苷(15)、尿囊素(16)和半乳糖醇(17)。化合物10、11a/b和15为首次从本属植物中分离得到;化合物7 ～ 9为首次从本种植物中分离得到。

1　仪器与试剂

紫外分光光度仪(TU-1901型);核磁共振波谱仪(瓦里安UNITYPLUS500型和JEOLJNM -A300型, TMS作内标);高效液相色谱仪:Waters600高效液相系统, ChromStationTM数据处理系统;冷冻干燥仪(德国产Christalpha2 -4主机)。硅胶包括薄层色谱用硅胶GF254 、硅胶H(10 ～ 40 μm)及柱色谱用硅胶(100 ～ 200目、200 ～ 300 目)均为青岛海洋化工厂产品;反相硅胶(RP-18, Pharmacia公司);SephadexLH-20(Pharmacia公司);聚酰胺薄膜(浙江黄岩市四青生化材料厂)。常规提取分离用溶剂均为分析纯;甲醇、乙腈为色谱纯。肉苁蓉药材采于内蒙古阿拉善左旗, 经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定为列当科植物肉苁蓉(Cistanchedeserticola)带鳞叶的肉质茎。

2　提取与分离

荒漠肉苁蓉干燥肉质茎20 kg, 用体积分数70%乙醇8倍量热回流提取3次, 60 ℃以下减压回收乙醇, 得稠膏。用水悬浮后, 依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇层萃取物(240 g)首先用AB-8型大孔树脂进行粗分, 依次用水, 体积分数20%、40%、60%和95%乙醇进行洗脱。其中水洗脱部位加入适量体积分数95%乙醇, 析出大量白色结晶, 反复重结晶得到化合物17 (4 g)。滤液部分经SephadexLH-20和HPLC纯化后得到化合物14 (800 mg)。大孔树脂体积分数20%乙醇洗脱部位以硅胶柱色谱分离, 依次采用CHCl3 -MeOH-H2 O(9∶1∶0.1 ～ 1∶2∶0)梯度洗脱。流分38 ～ 39合并,用半制备HPLC分离纯化得到化合物11a/b(32mg)及16 (22 mg)。流分50析出大量白色结晶,经甲醇淋洗后, 得到化合物13 (1 g)。流分51 ～ 54合并, 用SephadexLH-20柱色谱分离, 以体积分数10% ～ 50% MeOH水溶液为洗脱剂, 得到26 个流分。流分10 ～ 12经HPLC纯化后, 得到化合物10(21 mg)。流分14 ～ 19 经纯化得化合物4 (10mg)。流分56 ～ 58经SephadexLH-20和HPLC纯化, 得化合物12 (30 mg)。流分10 ～ 13经HPLC纯化得化合物7 (9 mg)。正丁醇层大孔树脂体积分数40%乙醇洗脱部位用SephadexLH-20柱色谱分离, 以体积分数10% ～60%MeOH水溶液进行洗脱, 得到22个流分。流分5～ 7合并, 再次以硅胶柱色谱进行分离, 以CHCl3 -MeOH-H2 O(15∶1∶0.1 ～ 1∶2∶0)不同比例的溶液梯度洗脱, 得到21个流分。其中, 流分4经HPLC纯化后得到化合物15 (19 mg);流分8 ～ 10合并后用半制备型HPLC进行分离得到化合物3 (9 mg), 2 (48 mg),8 (11 mg), 9 (20 mg);流分12 ～ 17合并后经HPLC纯化后得到化合物1 (400 mg);流分10 ～ 16合并, 用硅胶柱色谱进行分离, 以CHCl3 -MeOH-H2 O(15∶1∶0.1 ～ 1∶2∶0)不同比例的溶液梯度洗脱, 得到12个流分。其中流分4 ～ 6合并后用半制备型HPLC进行分离得到化合物5 (90 mg), 6 (480 mg)。

3　结构鉴定

化合物1:ESI-MSm/z:625[ M -H] - , 浅黄色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ:0.94 (3H, d, J=6.5 Hz, R-CH3 ), 2.68 (2H, m, A-β), 3.10 (1H, t, J=9.5 Hz, R-4), 3.59 (1H, m, A-α), 3.68 (1H, m, G-6), 3.86 (1H, m, A-α), 4.33(1H, d, J=8.0 Hz, G-1), 4.69 (1H, t, J=9.5 Hz, G-4), 5.00 (1H, s, R-1), 6.18 (1H, d, J=16.0 Hz, E-α), 6.48 (1H, dd, J=8.0, 1.5 Hz, A-6), 6.61 (1H,s, A-2), 6.62 (1H, d, J=7.5 Hz, A-5), 6.74 (1H,brd, J=7.5 Hz, E-5), 6.95 (1H, brd, J=7.5 Hz, E-6), 7.01 (1H, s, E-2), 7.44 (1H, d, J=16.0 Hz, E-β)。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13C-NMR数据与文献[ 4]报道的毛蕊花糖苷(acteoside)一致。化合物2:ESI-MSm/z:665[ M-H] - , 浅棕色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, DMSO-d6 )δ:0.90(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 1.96 (3H, s, OAc), 2.58

(2H, m, A-β ), 3.06 (1H, t, J=9.5 Hz, R-4), 3.88(1H, m, A-α), 3.93 (1H, t, J=9.5 Hz, G-3), 4.59(1H, s, R-1), 4.66 (1H, d, J=8.5 Hz, G-1), 4.80(1H, t, J=9.5 Hz, G-4), 6.21 (1H, d, J=16.0 Hz, E-α), 6.42 (1H, dd, J=8.0, 1.5 Hz, A-6), 6.56 (1H, d,J=1.5 Hz, A-2), 6.60 (1H, d, J=8.0 Hz, A-5), 6.75(1H, d, J=8.5 Hz, E-5), 6.96 (1H, brd, J=8.0 Hz, E-6), 7.02 (1H, d, J=2.0 Hz, E-2), 7.46 (1H, d, J=16.0 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 4]报道的2′-乙酰基毛蕊花糖苷(2′-acetylacteoside)一致。化合物3:ESI-MSm/z:637[ M -H] - , 浅棕色无定形粉末, TLC经5% FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR (500 MHz, CD3 OD)δ:1.08 (3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 2.82 (2H, m, A-β ), 3.83 (3H, s, OCH3 ), 4.08 (1H, m, A-α), 4.38(1H, d, J=8.0 Hz, G-1), 5.15 (1H, s, R-1), 6.26(1H, d, J=16.0 Hz, E-α), 6.70 (2H, m, A-6, A-2),6.76 (1H, d, J=8.0 Hz, A-5), 6.84 (1H, brd, J=8.0Hz, E-5), 6.95(1H, d, J=8.0 Hz, E-6), 7.05 (1H,brs, E-2), 7.59 (1H, d, J=16.0 Hz, E-β)。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 5] 报道的肉苁蓉苷C(cistanosideC)一致。化合物4:ESI-MSm/z:651[ M-H] -, 浅棕色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, CD3 OD)δ:1.08 (3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 2.82 (2H, m, A-

β), 3.83 (3H, s, A-OCH3 ), 3.88 (3H, s, E-OCH3 ),4.06 (1H, m, A-α), 4.38 (1H, d, J=8.0 Hz, G-1),5.19 (1H, s, R-1), 6.36 (1H, d, J=16.0 Hz, E-α),6.70 ～ 6.86 (4H, m, A-6, A-2, A-5, E-5), 7.05 (1H,d, J=8.0 Hz, E-6), 7.19 (1H, brs, E-2), 7.65 (1H,d, J=16.0 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 5] 报道的肉苁蓉苷D(cistanosideD)一致。

化合物5:ESI-MSm/z:625[ M-H] - , 棕色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR (300 MHz, DMSO-d6 )δ:1.10(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 2.69(2H, m, A-β ), 3.59 (1H, m, A-α), 3.80 (1H, m, A-α), 4.28(1H, d, J=8.4 Hz, G-1), 5.05(1H, s, R-1), 6.28(1H, d, J=15.6 Hz, E-α), 6.46(1H, dd, J=8.1,1.8 Hz, A-6), 6.59(1H, brs, A-2), 6.60(1H, brd, A-5), 6.74(1H, brd, J=8.1 Hz, E-5), 6.95(1H, dd,J=8.4, 1.5 Hz, E-6), 7.05(1H, d, J=1.5 Hz, E-2),7.47(1H, d, J=15.9 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 4] 报道的异毛蕊花糖苷(isoacteoside)一致。化合物6:ESI-MSm/z:665[ M-H] -, 浅黄色无定形粉末, TLC经5% FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, CD3 OD)δ:1.23(3H, d, J=6.5 Hz, R-CH3), 1.96(3H, s, OAc),2.66(2H, m, A-β), 3.95(1H, m, A-α), 4.44(1H, d,J=8.0 Hz, G-1), 4.81(1H, s, R-1), 6.28(1H, d, J=16.0 Hz, E-α), 6.49(1H, dd, J=8.0, 2.0 Hz, A-6),6.62(1H, d, J=2.0 Hz, A-2), 6.64(1H, d, J=8.0Hz, A-5), 6.77(1H, d, J=8.0 Hz, E-5), 6.90(1H,dd, J=8.5, 2.0 Hz, E-6), 7.04(1H, d, J=2.0 Hz, E-2), 7.56(1H, d, J=16.0 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13C-NMR数据与文献[ 4] 报道的管花苷B(tubulosideB)一致。化合物7:棕色无定形粉末, ESI-MSm/z:649[ M-H] -, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, DMSO-d6 )δ:1.07(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3), 1.87(3H, s, OAc),2.66(2H, m, A-β ), 4.26(1H, d, J=8.0 Hz, G-1),5.02(1H, s, R-1), 6.40(1H, d, J=16.0 Hz, E-α),6.40 ～ 6.60(3H, m, A-6, A-2, A-5), 6.74(2H, d, J=8.0 Hz, E-3, E-5), 6.95(2H, d, J=8.0 Hz, E-2, E-6), 7.46(1H, d, J=16.0 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 12] 报道的管花苷E(tubulosideE)一致。化合物8:ESI-MSm/z:649[ M-H] -, 浅棕色无定形粉末, TLC经5% FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(300 MHz, DMSO-d6 )δ:0.92(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3), 1.98(3H, s, OAc),2.67(2H, m, A-β ), 4.61(1H, s, R-1), 4.62(1H, d,J=8.0 Hz, G-1), 6.63 (2H, d, J=8.1 Hz, A-3, A-5), 6.75(1H, d, J=8.4 Hz, E-5), 6.95 ～ 7.00(3H,m, A-2, A-6, E-6), 7.02(1H, s, E-2), 7.47(1H, d, J=16.0 Hz, E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 HNMR和13 C-NMR数据与文献[ 13] 报道的盐生肉苁蓉苷D(salsasideD)一致。化合物9:ESI-MSm/z:679[ M -H] - , 浅黄色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, DMSO-d6 )δ:0.94(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 1.87(3H, s, OAc),2.68(2H, m, A-β ), 3.11(1H, t, J=9.0 Hz, R-4),3.48(1H, m, A-α), 3.75(3H, s, OCH3 ), 3.92(1H,m, A-α), 4.36(1H, d, J=7.5 Hz, G-1), 4.72(1H, t,J=9.5 Hz, G-4), 5.04(1H, s, R-1), 6.18(1H, d, J=16.5 Hz, E-α), 6.63 (1H, brd, J=8.0 Hz, A-6),6.69(1H, brd, A-5), 6.75 (1H, brd, J=7.5 Hz, E-5), 6.84(1H, brs, A-2), 6.95(1H, brd, J=7.5 Hz,E-6), 7.02(1H, brs, E-2), 7.46(1H, d, J=16.5 Hz,E-β )。13 C-NMR数据见表1。以上1 H-NMR和13 CNMR数据与文献[ 14] 报道的盐生肉苁蓉苷E(salsasideE)一致。化合物10:ESI-MSm/z:637[ M-H] -, 浅黄色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(300 MHz, CD3 OD)δ:1.24(3H, d, J=6.3 Hz, R-CH3 ), 2.23 (2H, m, A-β), 3.77(3H, s, OCH3 ), 4.33(1H, d, J=7.8 Hz, G-1), 5.18(1H, s, R-1), 6.27(1H, d, J=16.0 Hz, E-α), 6.53(1H, dd, J=8.1, 1.5 Hz, A-6), 6.62(1H,d, J=8.1 Hz, A-5), 6.67(1H, d, J=1.5 Hz, A-2),6.80(1H, brd, J=7.5 Hz, E-5), 7.01(1H, brd, J=7.5 Hz, E-6), 7.16(1H, d, J=1.5 Hz, E-2), 7.57(1H, d, J=16.0 Hz, E-β)。13 C-NMR数据见表1。以上1H-NMR和13 C-NMR数据与文献[ 15] 报道的plantainosideC一致。化合物11:ESI-MSm/z:607[ M-H] -, 浅黄色无定形粉末, TLC经5%FeCl3显色呈蓝灰色, UV365下显亮蓝色荧光。1 H-NMR(500 MHz, DMSO-d6 )δ:1.07(3H, d, J=6.0 Hz, R-CH3 ), 2.71 (2H, m, A-β), 4.26(1H, d, J=8.0 Hz, G-1), 5.29 (1H, s, R-1), 5.76(1H, d, J=13.0 Hz, Ea-α), 6.39(1H, d,J=16.0 Hz, Eb-α), 6.59(2H, d, J=8.0 Hz, Ab-3,5), 6.60(2H, d, J=8.0 Hz, Aa-3, 5), 6.73(2H, d,J=8.5 Hz, Ea-3, 5), 6.76(2H, d, J=8.5 Hz, Eb-3,5), 6.84(1H, d, J=13.0 Hz, Ea-β ), 6.97(2H, d,J=8.5 Hz, Aa-2, 6), 6.99(2H, d, J=8.5 Hz, Ab-2,6), 7.49(2H, d, J=8.5 Hz, Eb-2, 6), 7.53(1H, dJ=16.0 Hz, Eb-β ), 7.64(2H, d, J=8.5 Hz, Ea-2,6)。