摘 要　目的：HPLC测定在液氮条件研磨以及在自然风干条件下研磨不同种肉苁蓉中松果菊苷的含量，比较野生肉苁蓉和人工培养的肉苁蓉中松果菊苷含量。方法：采用日本岛津LC-20A高效液相色谱仪测定。色谱柱为YMC-Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm，5μm；YMC Co Ltd，Japan)；流动相：乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）；检测波长334 nm；流速0.7 mg·mL-1。柱温30 ℃。结果：处理条件的不同对松果菊苷含量有非常明显影响，液氮条件下研磨的肉苁蓉中松果菊苷的含量普遍高于自然风干条件下研磨的肉苁蓉；野生肉苁蓉的有效成分含量要远高于人工培养。

关键词　肉苁蓉；松果菊苷；高效液相色谱法

肉苁蓉（Herba Cistanches Y.C.Ma）又称红柳、大芸，属于濒危物种，是一种寄生在沙漠树木梭梭、红柳根部的寄生植物。在我国主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃和新疆[1]，素有“沙漠人参”之美誉，具有极高的药用价值。中国药典规定，以列当科植物肉苁蓉的干燥带鳞片肉质茎入药[2]，其主要药用成分有苯乙醇苷类，根据其取代基的不同可分为松果菊苷、类叶升麻苷、肉苁蓉苷等[3]。其中，松果菊苷（Echinacoside）具有改善性功能、抗氧化和清除自由基作用，而且具有一定的抗凋亡作用[4]。20世纪80年代以来，高速液相色谱技术（HPLC）广泛应用于天然产物的分离中，这种技术为苯乙醇苷类化合物的分离提供了一种简单快速的方法[5-6]。选择采用HPLC法，分析不同生长时期野生肉苁蓉和人工栽培肉苁蓉主要有效成分松果菊苷的含量，为合理开发和利用肉苁蓉及有效评价肉苁蓉的质量提供一定科学依据。

1　仪器与试剂

日本岛津LC-20A高效液相色谱仪，LC-20AT串联双柱塞泵，CTO-20A柱温箱，SPDA-20A紫外可见双波长检测器；昆山KQ-100型超声波清洗器；乙腈（色谱纯，天津光复化工研究所）；甲醇（色谱纯，天津光复化工研究所）；甲酸（色谱纯，天津光复化工研究所）；水（屈臣氏蒸馏水）。

对照品：松果菊苷，含量≥98.43%（上海原叶生物科技有限公司）。肉苁蓉样品5种：人工鲜一年期以下（未出头）肉苁蓉，人工鲜（出头）肉苁蓉，人工干肉苁蓉，野生鲜肉苁蓉，野生三年期以上干肉苁蓉。

2　方法与结果

2.1　色谱条件的确定

为使所测松果菊苷在液相色谱图中的峰与其他物质分离，以及控制泵压、时间能在合适的范围内，对色谱的条件进行了实验改进，经流动相的优化实验得出结论：温度越高，液相的保留时间越短，浓度越低，泵压越小且保留时间变短，但峰高变低，不利于测量。根据室温、泵的最大承压等客观状况，最终确定以流动相为乙腈-甲醇-1%甲酸（10:15:75）、检测波长334 nm、流速0.7 mL/min、柱温30 ℃的条件进行分析，得到的信息较为丰富，各成分峰形尖锐而且分离度良好。

2.2　色谱柱的确定

色谱柱：YMC-Inertsil ODS-SP(4.6 mm×150 mm，5 μm；YMC Co Ltd，Japan)。

2.3　实验溶液制备

2.3.1 标准品溶液的制备

精密称取松果菊苷标准品适量，加流动相乙腈-甲醇-1%甲酸（10:15:75），分别制成0.06 mg·mL-1、0.05 mg·mL- 1、0.04 mg·mL- 1、0.03 mg·mL- 1、0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1和0.005 mg·mL-1的松果菊苷标准品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备取适量的人工一年期以下（未出头）鲜肉苁蓉、人工鲜肉苁蓉、野生鲜肉苁蓉用研钵在液氮下研磨成粉末；同样再取适量的上述3种肉苁蓉切成块状，在阴凉通风处自然风干，干燥后，将其粉碎研磨成粉末状。人工干肉苁蓉及野生三年期以上干肉苁蓉直接粉碎研磨成粉末状。取上述制的肉苁蓉粉末（过100目筛）0.5 g，置于离心管中，加入流动相25 mL，称重后浸泡30 min，超声处理40 min，冷却后再称定重量，用流动相补足缺失的重量，摇匀后离心，取上清液用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.4　松果菊苷标准样品回归曲线的绘制将配制好的松果菊苷标准样品分别注入液相色

谱仪，以对照品的浓度（mg·L-1）为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线图，得到回归方程为Y=66 867 100X-46 360.83，R2=0.986 37，显示松果菊苷在0.1~1.2μg内呈良好线性关系。

2.5　样品测定

按照2.3所示方法，制备样品液，然后在色谱条件项下测定，标样及样品的HPLC图谱见图1。各样品中松果菊苷的含量见表1。

3　讨论

松果菊苷是肉苁蓉主要的有效成分之一，松果菊苷能够很好地代表肉苁蓉药理作用的化学物质基础，使药材的质量评价和其药理作用相对应，提高肉苁蓉质量评价的针对性。处理条件的不同对松果菊苷含量有明显的影响，在

液氮条件下研磨的肉苁蓉要比在自然风干条件下研磨的肉苁蓉中松果菊苷的含量普遍都高。普通的风干会降低松果菊苷的含量，可能是在风干过程中损耗或是松果菊苷发生了转化。为防止有效成分含量减少、保证肉苁蓉药效，应选取合适的处理方法。一直以来，大部分人认为肉苁蓉的人工栽培环境以及生长习性与野生品没有明显区别，质量也相差无几，往往只重视产量，并未对质量进行分析。本研究表明，人工栽培的肉苁蓉松果菊苷的含量低于野生肉苁蓉松果菊苷的含量。最高的为野生鲜肉苁蓉0.336 0%，含量最低的是人工鲜肉苁蓉0.007 0%。因此在栽培技术上仍需研究，提高有效成分的含量。肉苁蓉质量的好坏取决于其有效成分松果菊苷含量的多少，而有效成分又与采收的季节、时间、方法有很大的关系，所以肉苁蓉的采收应该考虑有效成分的积累状态和生长发育阶段。既考虑质量，又考虑产量。本方法测定松果菊苷的含量，简便、精密度高、重复性好，结果准确可靠。可用于肉苁蓉药材的含量测定。

参考文献：

[1] 雷载权.中药学[M].上海:上海科学技术出版社,2001.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[M].北京:化学工业出版社,2000.

[3] 吴培培,闫明,霍仕霞.苯乙醇苷类化合物的药理研究进展[J].医药导报,2006,30(3):142-143.

[4] 蒲小平,李晓蓉,李慧浓,等.肉苁蓉成分campneosideⅡ对神经毒索MPP+诱发细胞凋亡的保护作用[J].北京大学学报(医学版),2001,33(3):217-220.

[5] Lei L, Yang F, Zhang T, et al. Ito. preparative isolationand Purification of Acteoside and 2’-acety-lacteosidefrom Cistanches Salsa (C.A.Mey.)G.Beck by High-speedCounter-current Chromatography[J].J. Chromatogr. A.,2001,912:181-185.

[6] Li L, Tsao R, Liu Z, et al. Isolation and Purification ofActcoside and lsoacteoside from Plantago Psyllium L,byHigh-speed Counter-current Chromatography[J].J.Chromatogr. A.,2005,1063(1):161-169.