毕天琛2”，杨国宁＇，王素香＇，赵丹彤13，刘延娟！

1．菏泽市食品药品检验检测研究院，山东 菏泽 274000；

2．青岛科技大学 化工学院，山东 青岛 266000：

3．山东中医药大学 药学院，山东济南 250355

［摘要］目的：建立内苁蓉饮片的高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱，结合化学模式识别技术，为不同产地肉苁蓉饮片质量评价提供参考。方法：收集10批不同产地肉苁蓉样品。色谱柱为Agilent ZORBAXC1s；流动相为乙睛-0.5％乙酸（梯度洗脱）；流速为1.0mL-min；检测波长为330nm；柱温为30℃。采用“中药指纹图谱相似度评价系统（2012A版）”计算相似度，结合聚类分析和主成分分析对肉苁蓉饮片进行模式识别。结果：建立了肉苁蓉饮片的指纹图谱，确定了17个共有峰，并通过对照品比对指认了其中8个峰。不同产地肉苁蓉饮片相似度＞0.94。10批样品可聚为2类，分析确定了4个主成分。结论：建立的HPLC指纹图谱方法准确高效、灵敏度高，可为不同产地内苁蓉饮片质量控制和评价提供参考。

［关键词］ 肉苁蓉饮片；指纹图谱；化学模式识别；主成分分析；聚类分析

肉苁蓉为多年生草本寄生植物，为列当科植物肉苁蓉 Cistanche deserticola Y.C.Ma或德赢vwin登录 C.nubulosa（Schenk）Wight的干燥带鳞叶的肉质茎！＂。肉苁蓉始载于《神农本草经》，为我国传统沙生名贵补益类中药，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能-3。主要产地包括内蒙古、宁夏、新疆、甘肃和青海等地。肉苁蓉的化学成分主要有苯苷类、环烯醚萜及其苷类、木脂素及其苷类、多糖及单萜苷类、生物碱等。《中华人民共和国药典》2020年版肉苁蓉品种含量测定项下仅规定了松果菊苷和毛蕊花糖苷总量，并未对其他成分做出相关规定。目前，已有关于肉苁蓉中管花苷A、肉苁蓉苷A、肉苁蓉苷C、异毛蕊花糖苷等成分含量测定和指纹图谱研究的报道，但是只是对其中几种指标性成分进行研究，不能全面反映肉苁蓉饮片整体质量的优劣，本研究采用高效液相色谱法（HPLC）指纹图谱结合化学模式识别法对肉苁蓉饮片质量进行综合分析评价，为其质量标准研究提供切实可行的参考。

1 材料

1.1 仪器

1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）：XS105型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）：FRQ-1010T型超声波清洗器（杭州法兰特超声波科技有限公司）；Milli-Q AdvantageA10型超纯水仪（美国Millipore 公司）

1.2 试药

对照品松果菊苷、毛蕊花糖苷（中国食品药品检定研究院，批号分别为111670-201706、111530-201713）；对照品京尼平苷酸、肉苁蓉苷A、管花苷A、异毛蕊花糖苷、2＇-乙酰毛蕊花糖苷和管花苷B（成都普菲得生物技术有限公司，批号分别为 18112101、17062001、18032105、18102404、19011705、17052704）：甲醇、乙腈为色谱纯（德国Merck公司）：乙酸为优级纯（德国Merck公司）。

10批肉苁蓉饮片均购自市场，经菏泽市食品药品检验检测研究院马海春副主任中药师鉴定为列当科植物肉苁蓉Cistanche deserticola Y．C．Ma的干燥带鳞叶的肉质茎，见表1。

表1 肉苁蓉饮片样品信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAXC1s（250mmx4.6mm，5μm）：流动相：乙腈（A）-0.5％乙酸（B），梯度洗脱（0～7min，10％～19％A：7～25min，19％～22％A：25～35min，22％～25％A：35～36min，25％～10％A：36～40min，10％A）：检测波长：330nm；柱温：30 ℃：进样量：10pL：流速：1.0mL-min＇。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取各对照品适量，加入50％甲醇溶解制备成含京尼平苷酸0.980mgmL、松果菊苷1.052mgmL、肉苁蓉苷A1.044mg-mL＊、管花苷A0.953mg-mL＇、毛蕊花糖苷0.986mg-mL、异毛蕊花糖苷1.078mg-mL、2＇-乙酰毛蕊花糖苷1.181mgmL、管花苷B0.986mg-mL的混合对照品储备溶液。精密量取上述储备溶液5mL，置25mL量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液2。

2.3 供试品溶液的制备

取肉苁蓉样品粉末（过四号筛）1.0g，精密称定，置于100mL棕色量瓶中，精密加入50％甲醇50mL，称量，超声提取40min，放冷后加50％甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得口。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度试验 取编号为S1肉苁蓉饮片制备的供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，连续进样6次，记录峰面积和保留时间。以松果菊苷（4号峰）为参照峰，分别计算其他16个色谱峰相对峰面积和相对保留时间，并计算RSD．结果16个色谱峰相对峰面积的RSD均不大于0.58％，相对保留时间的RSD均不大于1.45％，表明该方法的精密度良好。

2.4.2 稳定性试验 取编号为S1肉苁蓉饮片制备的供试品溶液，分别室温放置0、2、4、6、12、24h后，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积和保留时间。以松果菊苷（4号峰）为参照峰，分别计算其他16个色谱峰相对峰面积和相对保留时间，并计算RSD。结果16个共有色谱峰相对峰面积的RSD均不大于0.74％，相对保留时间的RSD均不大于1.82％，表明供试品溶液在室温下放置24h内稳定。

2.4.3 重复性试验 称取同一份肉苁蓉饮片样品（S1）粉末约1.0g，精密称定6份，按照

2.3项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定。以松果菊苷（4号峰）为参照峰，分别计算其他16个色谱峰相对峰面积和相对保留时间，并计算RSD。结果16个共有色谱峰相对峰面积的RSD均不大于0.26％，相对保留时间的RSD均不大于1.24％，表明该方法重复性良好。

2.5 指纹图谱的建立与分析

2.5.1 HPLC 指纹图谱测定 取不同产地10批次肉苁蓉饮片样品，按照2.3项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件进行测定，记录色谱图，结果见图1。