冯洁2，郭晔红2，未文娟，安青2，陈彬，焦鹏

1．甘肃省干旱生境作物学重点实验室，甘肃兰州730070：2．甘肃农业大学 农学院，甘肃兰州730070

摘 要 目的：研究不同寄主植物以及不同产地对肉苁蓉4种苯乙醇苷和可溶性多糖含量的影响。方法：分别采用HPLC法和蕙酮-硫酸法测定内苁蓉4种苯乙醇苷和可溶性多糖含量。结果：在不同寄主植物对内苁蓉有效成分影响的研究中，秋季采收的四超滨藜寄生内苁蓉中4种苯乙醇苷和可溶性多糖含量均高于梭梭寄生肉苁蓉；春季采收的四翅滨藜寄生内苁蓉中松果菊苷、内苁蓉苷A和毛菜花糖苷含量高于被梭寄生肉苁蒙，而管花苷A和可溶性多糖含量低于梭梭寄生内苁蓉。在不同产地对内苁蓉有效成分影响的研究中，以甘肃民勤松果菊苷和管花苷A含量最高：甘肃景泰内苁蓉苷A和可溶性多糖含量最高；毛葛花糖苷含量则以甘肃靖选最高。4种苯乙醇苷含量均以春季采收时最佳；春季采收的梭梭寄生内苁蓉中可溶性多糖含量高于秋季，四翅滨藜寄生肉苁蓉则以秋季最佳。结论：不同寄主、产地及采收期内苁蓉药材中5种有效成分含量存在较大差异，可为内苁蓉后续的开发利用提供实验依据。

关键词 内苁蓉；梭梭；四翅滨藜：苯乙醇苷：可溶性多糖

中图分类号：R284.2       文献标识码：A    文章编号：1006-9690（2021）05-0018-06

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉（Cistanches deseni-cola Y.C.Ma）或德赢vwin登录 （Cistanche tubulosa （Schenk）Wight）干燥带鳞叶的肉质茎，亦称大芸，是我国名贵的中药材，也是甘肃省道地药材之一、主要活性成分为苯乙醇苷类和可溶性多糖［2-9。现代药理学研究表明，肉苁蓉具有助阳通便、抗氧化、抗肿瘤、增强机体免疫力等药理作用6-，主要用于阳痿、不孕、肠燥便秘等。

肉苁蓉传统寄主植物为藜科植物梭梭（Haloxy-lon ammodendron（C.A.Mey.）Bunge）和白梭梭 （Haloxylon persicum Bunge ex Boiss et Buhse），具有 耐旱、耐寒、耐盐碱、耐贫瘠等特性，以梭梭为寄主植物种植肉苁蓉已经获得了成功，但梭梭年生长量较小，经济价值较低［5-6］。为了解决传统寄主植物的弊端，甘肃地区技术人员成功种植以四翅滨藜（Atriplex canescens（Pursh）Nutt.）为寄主植物的肉 苁蓉，四翅滨藜和梭梭都属于藜科属植物，两者基源相同，这为接种肉苁蓉提供了科学依据，四翅滨藜生物量大，接种成功可为肉苁蓉提供更多的养分，有益于肉苁蓉的生长，研究表明，四翅滨藜在高盐碱地的造林成活率明显高于红柳、多枝柽柳、梭梭等抗盐碱树种［］，不同寄主植物生长的肉苁蓉，产地、采收期的不同也会使肉苁蓉的有效成分含量存在差异［-20］。2015年版《中国药典》只规定了以松果菊苷和毛蕊花糖苷2种苯乙醇苷成分作为指标成分，而中医理论研究表明，中药药效的发挥是多种有效成分共同作用的结果，有效成分含量的多少将直接影响中药药效，因此仅以2种苯乙醇苷成分并不足以全面反映肉苁蓉的整体质量21-23。

由于对四翅滨藜寄生肉苁蓉研究较少，而为了探究这种新型寄主植物对肉苁蓉的药效成分的影响，本研究以春、秋2个采收期的四翅滨藜寄生肉苁蓉为研究对象，以梭梭寄生肉苁蓉为对照，基于5种有效成分一松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A、毛蕊花糖苷、可溶性多糖对肉苁蓉质量进行较全面考察和分析，进一步揭示了肉苁蓉整体质量特征和道地性品质内涵。同时研究甘肃不同产地梭梭寄生肉苁蓉功效成分的差异性，旨在为肉苁蓉道地产区和采收

季节的确定提供科学的理论依据。

1 材料与仪器

1.1 材料

梭梭寄生肉苁蓉分别采收于甘肃省民勤县、景泰县、靖远县肉苁蓉种植基地，四翅滨藜寄生肉苁蓉采收于甘肃省民勤治沙综合试验站。样品经流水洗净，去除泥沙，蒸制软化，切片，再于70℃烘干，粉碎，过4号筛，备用。

1.2 仪器与试剂

试验仪器：Waters Acquity 液相色谱仪，PDA检测器，Empower色谱工作站及四元溶剂管理系统（美国Waters 公司）：AL104分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）：超声波清洗机（深圳市得康科技有限公司）：超纯水器-优普系列（成都优普仪器设备有限公司）：DK-II数显恒温水浴锅（天津伊若达仪器设备有限公司）：UV-2450紫外-可见分光光度计（东莞市宏诚光学制品有限公司）。

试验试剂：蒽酮、浓硫酸、乙醇、对照品松果菊苷（批号82854-37-3，质量分数≥98％）、肉苁蓉苷A（批号93236-42-1，质量分数≥95％）、毛蕊花糖苷（批号61276-17-3，质量分数≥98％）均购于成都普菲德生物技术有限公司；管花苷A（批号112516-05-9，质量分数≥98％）购于上海源叶生物科技有限公司：无水葡萄糖购于上海源叶生物科技有限公司：甲酸（德国 Menk公司，色谱纯）：甲醇（德国Merck公司，色谱纯）；超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 测定方法

2.1 苯乙醇苷成分的测定

2.1.1 混合对照品溶液的制备

精密称取松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A和毛蕊花糖苷对照品适量，置棕色量瓶中，加50％甲醇制成浓度分别为0.57、0.16、0.016.0.048mg＊mL-＇混 合溶液，摇匀，即得。

2.1.2 供试品溶液的制备

称定样品粉末1.0g，置100mL棕色量瓶中，精密加入50％甲醇50mL，密塞，摇匀，称定，浸泡30min，超声处理（功率250W，频率35kHz）40min，待冷却至室温，称定，加50％甲醇补足减失质量，摇匀，静置，取上清液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.1.3 色谱条件

图1 混合对照品（A）和供试品（B）HPLC图

Fig.1 HPLC Chromatograme of mived reference suhstances(A)and smple(B) 注：1．松果菊苷：2．肉苁蓉苷A：3．管花苷A：4．毛蕊花糖苷。

2.1.4 线性关系考察

分别取上述混合对照品溶液0.5、5、10、15、20μL，按“2.1.3”项色谱条件进行测定。以对照品进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程分别为松果菊苷Y＝1x10°X＋44933，r＝0.999 8，线性范围0.285-11.4 μg：肉苁蓉苷AY＝1x10°X-4454.9．r＝0.9999，线性范围 0.08-3.2 μg；管花苷AY＝2x10X-9819.9，r＝ 0.9992，线性范围0.008～0.32 μg：毛蕊花糖苷Y＝1x10°x-12 989，r＝0.999 4，线性范围0.024～ 0.96μg·μm）：流动相为甲醇（A）-0.1％甲酸水溶液（B），洗脱梯度0-5min，15％-20％A：5-12 min，20％-45%A:12~16 min,45%~55%A:16~20 min,55%~ 35%A:20-22 min.35%-15%A:22~24 min,15%A; 流速1.0mL·min-＇：检测波长330nm：进样量10L：柱温30℃。对照品和供试品的色谱图见图1。

2.1.5 精密度试验

取“2.1.1”项混合对照品溶液10μL，连续进样6次，记录4种对照品各自的峰面积，结果松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A和毛蕊花糖苷峰面积RSD值分别为0.20％、0.18％、2.10％、1.45％，表明仪器精密度良好。

2.1.6 重复性试验

取同一批肉苁蓉样品6份，按“2.1.2”项制备供试品溶液“21.3”项色谱条件进样，记录峰面积。计算得到松果菊苷、肉苁蓉苷A、管花苷A和毛蕊花糖苷的RSD值分别为0.08％、0.40％、1.11％、0.81％，表明该方法重复性良好。