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郭小莉, 高如意, 许明君, 刘文英, 柏伟荣
(江苏康缘药业股份有限公司,江苏连云港222001)
摘要:目的 优化复方肉苁蓉酒提取工艺。方法 以浸提时间、基酒度数、基酒倍数为影响因素,松果菊苷+毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量为评价指标,在正交试验基础上分别采用AHP法、CRITIC法、AHP-CRITIC混合加权法优化提取工艺。结果 AHP-CRITIC混合加权法所确定的权重系数更科学合理,最佳条件为浸提时间42d,基酒度数60%,基酒倍数8倍,松果菊苷+毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量分别为2.03、2.56、2.09g,综合评分为98.87分。结论 该方法重复性良好,稳定可行,可用于提取复方肉苁蓉酒。
关键词:复方肉苁蓉酒:提取;正交试验:AHP法:CRITIC法;AHP-CRITIC混合加权法
中图分类号:R284.2 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2021)09-2469-05
doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2021.09.036
复方肉苁蓉保健酒由德赢vwin登录 、红景天、西洋参、枸杞4味中药组成。方中肉苁蓉补肾气,养精血;红景天补气健脾:西洋参补气养阴,清热生津,加强红景天益气之功:佐以补肝肾益精血之枸杞,诸药合用,平补阴阳,调养五脏,温而不燥,补而不腻,无阴阳偏盛之弊,共奏补肾填精益气之功效,具有缓解体力疲劳、增强免疫力的双重保健功效。
保健酒是指以酿造酒、蒸馏酒或食用酒精为酒基,以中药材为原材料,利用萃取、浸提等技术,得到中药有效成份进而配制所得的具有一定保健功能的本品,它是否具有保健功能,中药材有效成分的提取是关键。本实验以复方肉苁蓉保健酒中君药肉苁蓉的功效成分松果菊苷、毛蕊花糖苷,红景天中红景天苷及产品中总皂苷为指标,采用层次分析法(AHP)结合CRITIC法计算权重系数,求出综合评分,正交试验优化该方提取工艺,以期在保证其功效的基础上为后续相关开发提供依据。
1 材料
1.1 仅器 Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司):LC-20AT液相色谱仪、UV-2700型紫外可见分光光度计(日本岛津公司):XP6、MS-105DU电子分析天平(瑞士梅特勒托利多公司)。
1.2 试剂与药物 松果菊苷(纯度89.7%,批号111670-201706)、毛蕊花糖苷(纯度92.5%,批号 111530-201713)、红景天苷(纯度98.8%,批号 110818-201709)、人参皂苷Re(纯度97.4%,110754-201626)对照品均购自中国食品药品检定研究院。德赢vwin登录 购自新疆北达苁蓉生物科技有限公司,红景天购自亳州市国一堂中药饮片有限公司,西洋参购自云南白药文山七花有限责任公司,枸杞购自江苏国苏中药材有限公司,经检验均符合2015年版《中国药典》一部规定。乙腈、甲醇为色谱纯,购自美国天地公司;其他试剂均为分析纯:水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 松果菊苷、毛蕊花糖苷含量测定 参考文献 B-4]报道。
2.1.1 对照品溶液制备 精密称取对照品适量,置于棕色量瓶中,50%甲醇溶解定容至刻度,即得(松果菊苷、毛蕊花糖苷质量浓度分别为1.6765、0.629mg/ml)。
2.1.2 供试品溶液制备 精密量取本品1ml至2ml量瓶中,50%甲醇溶解定容至刻度,超声处理15min,50%甲醇定容至刻度,离心,取上清液,即得。
2.1.3 色谱条件 Intersustain Swif C色谱柱(4.6mmx 250mm,5μm):流动相乙腩(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱(0-30 min.15%-27%A:30-40min,27%A):体积流量1.0ml/min:检测波长330mm:柱温30℃:进样量10μL。色谱图见图1.
1.松果菊苷 2.毛蕊花糖苷
图1 松果菊苷、毛葛花糖苷HPLC 色谱图
2.1.4 线性关系考察 精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液5ml,置于10ml棕色量瓶中,50%甲醇定容至刻度,摇匀,逐级稀释,分别吸取10pL,在“2.1.3”项色谱条件下进样测定。以峰面积为纵坐标(Y),对照品质量浓度为横坐标(X)进行回归,得方程分别为松果菊苷Y-12 282 607.55X+429 234.77(R2=0.999 2),线性范围0.0524~ 1.6765mg/ml:毛蕊花糖苷Y=16 956 179.10X+64 108.76 (R2=0.999 5),线性范围0.0197~0.6290mg/mL。
2.1.5 精密度试验 取供试品溶液及“2.1.4”项下对照品溶液 DZ1、DZ4、DZ6.在“2.1.3”项色谱条件下进样测定6次,测得DZ1、DZ4、DZ6中松果菊苷峰面积 RSD分别为0.23%、0.44%、0.31%,毛蕊花糖苷分别为0.44%、0.54%、0.52%,而供试品溶液中两者峰面积RSD分别为0.10%、0.16%,表明仪器精密度良好。
2.1.6 稳定性试验 精密吸取“2.1.4”项下对照品溶液DZ4及供试品溶液,于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h在“2.1.3”项色谱条件下进样测定,测得2种溶液中松果菊苷峰面积RSD分别为0.76%、0.23%。毛蕊花糖苷分别为1.42%、0.18%,表明溶液在24h内稳定性良好(C)核市附据、2项品对
2.1.7 重复性试验 取本品适量,按“2.1.2”项下方法制备6份供试品溶液,在“21.3”项色谱条件下进样测定,测得松果菊苷,毛蕊花糖苷含量RSD分别为1.45%、1.40%,表明该方法重复性良好。
2.1.8 加样回收率试验 按照供试品溶液中松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的100%水平,取对照品溶液适量于2ml棕色量瓶中,氮吹至干,加入本品0.5ml,平行6份,按“21.2”项下方法制备供试品溶液,在“21.3”项色谱条件下进样测定,计算回收率。结果,松果菊苷、毛蕊花糖苷平均加样回收率分别为100.32%、99.42%,RSD分别为1.70%、1.85%。
2.2 红景天苷含量测定
2.2.1 对照品溶液制备 精密称取红景天苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.852mg该成分的溶液,摇匀,即得。
2.2.2 供试品溶液制备 精密量取本品1ml,置于2mL量瓶中,甲醇定容至刻度,超声处理20min,放冷,甲醇补足减失的质量,摇匀,离心,取上清液,即得。
2.2.3 色谱条件 参考文献[B-6] 报道,Agilent Ca色谱柱(4.6mmx250mm,5μm):体积流量1mL/min:流动相乙腩(A)-0.3%磷酸(B),梯度洗脱(0-20mim,3%~5%A:20~40 min,5%A):柱温35℃;检测波长275mm;进样量5μL.色谱图见图2,
B.供试品
1.红景天苷
图2 红景天苷HPLC色谱图
2.2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液适量,置于10mL量瓶中,甲醇逐级稀释并定容至刻度,分别吸取5p止,注入高效液相色谱仪,在“2.2.3”项色谱条件下进样测定,以峰面积为纵坐标(Y),对照品质量浓度为横坐标(X)进行回归,得方程为Y=10534278.65X+334 643.51(R2=0.9998),线性范围 0.027-0.852mg/ml.
2.2.5 精密度试验 精密吸取“2.2.4”项下同一份对照品、供试品溶液,在“2.2.3”项色谱条件下进样测定6次,测得2种溶液中红景天苷峰面积RSD分别为0.57%0.98%,表明仪器精密度良好。品、供试品溶液,于0、2、4、8、12、16、20、24h在“22.3”项色谱条件下进样测定,测得2种溶液中红景天苷峰面积RSD分别为0.49%、1.05%,表明溶液在24h内稳定性良好。
2.2.7 重复性试验 取本品适量,按“2.2.2”项下方法制备6份供试品溶液,在“2.2.3”项色谱条件下进样测定,测得红景天苷含量RSD为1.45%,表明该方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 按照供试品溶液中红景天苷含量的100%水平,取对照品溶液(0.4191mg/mL)0.2mL置于2ml棕色量瓶中,加入本品0.5mL,平行6份,按2.2.2”项下方法制备供试品溶液,在“2.2.3”项色谱条件下进样测定,计算回收率。结果,红景天苷平均加样回收率为101.48%,RSD<3%。
2.3总皂普含量测定
2.3.1 对照品溶液制备 精密称取人参皂苷Re对照品适量,甲醇制成每1ml含2mg该成分的溶液,据匀,即得。取100μL至蒸发皿中,置于60℃水浴中挥干,加1mL纯化水溶解,10ml注射器作为层析柱,内装3cm Ameitite-XAD-2大孔树脂,上加1cm中性氧化铝。先用25ml.70%乙醇洗柱,弃去洗脱液,再用25ml.水洗柱,弃去洗脱液。将1.0mL对照品溶液加入层析柱中,先用25ml水洗柱。弃去洗脱液,再用25ml.70%乙醇洗脱,收集洗脱液于蒸发皿中,置于60℃水浴再挥干,用于显色。
23.2 供试品溶液制备 取本品适量,离心,精密量取1ml。置于10ml量瓶中,37%乙醇定容至刻度,摇匀,吸取1mL。置于水浴中挥干,1ml水溶解残渣,进行柱层析,以下操作同“2.3.1”项。
2.3.3 吸光度测定 在已挥干的对照品、供试品溶液中精密加入0.2ml.5%香草醛冰乙酸溶液,残渣溶解,再加0.8ml高氯酸,混匀后移入10ml比色管中,60℃水浴加热10min,取出,冰浴冷却,精密加入5.0ml.冰乙酸,摇匀,在560mm波长处测定吸光度。
2.4 正交试验 在前期单因素试验基础上,并结合《保健食品注册与备案管理办法》中关于保健酒的酒精度数和食用量的规定,以松果菊苷+毛蕊花糖苷、红景天苷、总皂苷量为评价指标,浸提时间(A)、基酒度数(B)、基酒倍数(C)为影响因素,采用1、(3)正交试验优化提取工艺,计算综合评分Y,公式为Y=(松果菊苷+毛蕊花糖苷总量/最高总量x权重系数+红景天苷含量/最高含量x权重系数+总皂苷含量/最高含量x权重系数)x100,1,(3')正交试验优化提取工艺,结果见表1。
表1 试验设计与结果
试验号 | 因素 | 松果菊营+毛蕊 | 红景天管/g | 总皂营/g | Y综合评分1分 | |||
4浸提时间日 | B基酒度数/% | C 基酒倍数/倍 | D(空白) | 花糖苷/g | ||||
1 | 35(1) | 55(1) | 6(1) | 1 | 1.42 | 1.80 | 1.31 | 60.84 |
2 | 35(1) | 60(2) | 8(2) | 2 | 1.73 | 2.57 | 1.91 | 79.84 |
3 | 35(1) | 65(3) | 10(3) | 3 | 1.90 | 2.20 | 2.11 | 85.52 |
4 | 42(2) | 55(1) | 8(2) | 3 | 2.09 | 2.93 | 2.32 | 95.97 |
5 | 42(2) | 60(2) | 10(3) | 1 | 2.20 | 2.12 | 2.41 | 96.97 |
6 | 42(2) | 65(3) | 6(1) | 2 | 1.65 | 2.15 | 1.42 | 69.51 |
7 | 49(3) | 55(1) | 10(3) | 2 | 1.95 | 1.75 | 2.18 | 86.07 |
8 | 49(3) | 60(2) | 6(1) | 3 | 1.79 | 1.95 | 1.62 | 75.07 |
9 | 49(3) | 65(3) | 8(2) | 1 | 2.14 | 2.85 | 2.26 | 96.12 |
K1 | 75.400 | 80.960 | 68,470 | 84,640 | - | - | - | - |
K2 | 87.480 | 83.953 | 90,643 | 78.473 | - | - | - | - |
K3 | 85.750 | 83.717 | 89.517 | 85,517 | - | - |
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