2.2.2 洗脱方法 取经预处理的AB-8大孔吸附树脂1.0g，置于锥形瓶中，加入质量浓度为8mg／mL的德赢vwin登录 多糖溶液50mL，摇床振摇3h，抽滤，接流出液，浓缩，烘干，备用。

2.2.3 实验参数优化 在参考文献［17-19］和前期单因素实验的基础上，以多糖脱色率、多糖保留率为指标计算综合评分（根据前期研究结果设置权重均为50％），选用L（3）正交实验设计对大孔吸附树脂脱色的洗脱流速（A.BV／h）、脱色时间（B.h）、上样质量浓度（C.mg／mL）进行优化，确定德赢vwin登录 多糖的大孔吸附树脂脱色最优工艺条件。德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验因素与水平见表1，实验设计与结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验因素与水平

Tab 1 Factors and levels of orthogonal experiment on decolorization of macroporous adsorption re-sin of C. tubulosa polysaccharide

表2 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验设计与结果

Tab 2 Orthogonal experimental design and results on

decolorization of macroporous adsorption resin

of C.tubulosa polysaccharide

由表2的极差结果可知，各因素对综合评分的影响由高到低为C＞A＞B，说明上样质量浓度对大孔吸附树脂脱色效果的影响最大，其次是洗脱流速和脱色时间。由表3的方差分析结果可知，上样质量浓度和洗脱流速对大孔吸附树脂的脱色效果均有显著影响，脱色时间的影响不显著。根据上述正交实验结果可知，大孔吸附树脂脱色的最优参数组合为A2B1G．即洗脱流速1.2 BV／h，

脱色时间9h，上样质量浓度25mg／mL。

表3 德赢vwin登录 多糖大孔吸附树脂脱色的正交实验方差分析结果

Tab 3 ANOVA for orthogonal esperiment on decolo-

rization of macroporous adsorption resin deco-

lorization of C.tubulosa polysaccharide

2.2.4 验证实验 取质量浓度为25mg／mL的德赢vwin登录 多糖溶液3份，分别上样至填有大孔吸附树脂的层析柱（100cmx6cm）中，分别吸附9h后开始洗脱，洗脱流速为1.2BV／h．接流出液，浓缩后检测多糖脱色率、多糖保留率并计算综合评分。结果，3次重复试验综合评分分别为63.43％、63.29％、63.34％，平均值为63.35％（RSD＝0.11％，n＝3），表明此脱色方法可行。

2.3 德赢vwin登录 粗多糖的初步分离

2.3.1 DEAE-650M离子交换填料的预处理 先把DEAE-650M离子交换填料倒入较大的容器内，加入3～4倍体积的水浸泡，等填料大部分沉底后弃去上清液，再加入水重复以上操作3～5次，备用。

2.3.2 粗多糖分离 将层析柱（80cmx4cm）垂直固定在层析架上，装上经预处理的DEAE-650M离子交换填料，将已脱色的德赢vwin登录 多糖（记为CTC）溶液250mL，以25mg／mL的质量浓度上样至层析柱中，分别用水和系列浓度的氯化钠溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol／L）依次进行洗脱，收集洗脱液。其中，水洗脱下来的成分为中性多糖，不同浓度的氯化钠溶液洗脱得到的为酸性多糖。将收集的洗脱液按洗脱曲线合并，经浓缩、透析后，冻干得到多个多糖组分。结果，分离出1种中性多糖，记为CTZ，含量为229.2mg／g：0.1、0.2、0.3、0.4.0.5 mol／L氯化钠溶液洗脱的各酸性多糖分别命名为CT-1、CT-2、CT-3，CT-4、CT-5，含量分别为168.0、123.2、121.6、 54,4、11.2mg/g。

2.4 德赢vwin登录 多糖对巨噬细胞免疫活性的影响

2.4.1 细胞增殖率的检测 采用CCK-8法进行检测。实验分为空白组［