摘要通过大鼠急性经口毒性试验、三项遗传毒性试验( Ames 试验、鼠骨髓细胞微核试验、小鼠精子畸形试验) 及30 天喂养试验对复方德赢vwin登录 片安全性进行评价。以26． 40 g /kg·bw 剂量给予大鼠灌胃后，无中毒现象，观察2周动物无死亡，试验结束后大体观察解剖动物未见明显异常。遗传毒性实验结果均为阴性。30 天喂养试验中各剂量组大鼠的体重、摄食量、血液学及生化指标等较对照组差异无显著性( P ＞ 0． 05) ; 组织病理学检查未见因样品产生的异常改变，在试验剂量范围内未见毒性副作用。因此，在本实验条件下复方德赢vwin登录 片具有较好安全性。

关键词复方德赢vwin登录 片急性毒性试验遗传毒性试验30 天喂养试验

复方德赢vwin登录 片由德赢vwin登录 、淫羊藿配伍牛磺酸、葡萄糖酸锌组成。德赢vwin登录 为新疆特色药材，具有提高肾功能、抗疲劳等多种药理作用［1］。淫羊藿具有补肾益骨、祛除风湿的作用［2］。牛磺酸属典型非蛋白质氨基酸，能够对胞内外渗透压进行平衡、减少氧自由基、达到抗过氧化损伤之目的，同时也能够平衡细胞钙、促进膜稳定［3］。葡萄糖酸锌为有机锌补剂，可抗疲劳，对治疗缺锌引起的生长发育迟缓、免疫力下降等有确切功效［4］。淫羊藿、德赢vwin登录 均为常用助阳药，常配合使用［5，6］。牛磺酸和锌为营养素补充剂，中药配伍营养素补充剂，可以加强疗效［7，8］，通过前期研究发现复方德赢vwin登录 片在延长小鼠负重游泳时间，加速小鼠血清尿素清除，促进肝糖原储备量，减少运动后血乳酸增加方面作用显著，优于单一提取物组。虽然已有大量研究证实淫羊藿、德赢vwin登录 单独使用的安全性［9 －12］，但复方德赢vwin登录 片四药合用的安全性尚无文献报道，本文对复方德赢vwin登录 片进行全面的毒理学安全性试验研究，为其在保健食品和医药领域的应用提供科学依据。

1 实验部分

1． 1 试剂及仪器

自制受试复方片组成为德赢vwin登录 提取物( 原材料来自新疆和田地区，折合生药材4． 0 g /d) ( g /d为日用量克/天) 、淫羊藿提取物( 折合生药材4． 0 g /d) 、牛磺酸( 0． 4 g /d) 、葡萄糖酸锌( 折合锌10 mg /d) 。片剂折合剂量为0． 066 g /kg·bw( g /kg·bw 为每千克体重用药量g) 。BS － 420 全自动生化分析仪( 深圳迈瑞生物医疗电子有限公司) ，BC － 2800vet 血细胞分析仪( 深圳迈瑞生物医疗电子有限公司) ，LW200LT 型显微镜( 上海聚亮光学仪器有限公司)

1． 2 试验动物

SPF 级昆明种小鼠［许可证号: SCXK( 苏) 2012 －0004，质量合格证号: 6100170000222、61001700002275］、SPF 级SD 大鼠［许可证号: SCXK( 苏) 2012 － 0004，质量合格证号为61001700002195、61001700002244］，于东南大学实验动物中心饲养，试验动物房屏障系统: 温湿度分别为20 ～25℃、45% ～65%。

1． 3 实验方法

1． 3． 1 大鼠急性毒性试验

SD 大鼠( 180 － 220 g) ，分雌雄两组各10 只。按最大耐受剂量法( MTD) 设26． 40 g /kg·bw 为灌胃剂量( 人体推荐量的400 倍) 。配制浓度66%的样品蒸馏水溶液，每次20 mL /kg·bw 经口灌胃，二次间隔6小时。动物在给药前16 小时禁食，饮水不受限，2周内，查看动物情况，具体方法按文献［13］。

1． 3． 2 鼠伤寒沙门氏菌试验( Ames 试验)采用组氨酸缺乏型鼠伤寒沙门氏菌TA 97、TA98、TA 100、TA102，均符合生物学标准，检测间接诱变后大鼠肝微粒体酶S － 9 的活性。设5 000、1 000、200、40、8 g /皿( “皿”表示菌株培养平皿) 五个剂量组，另设三组对照，即溶剂( 蒸馏水) 、0． 1 mL 阳性对照物( 加入致突变物) 、自发回变组。每组三个平行皿，重复试验。

1． 3． 3 小鼠骨髓细胞微核试验

按文献方法［13］，剂量分别为10． 0 g /kg·bw、5． 0g /kg·bw、2． 5 g /kg·bw，并设溶剂对照组( 蒸馏水) 、阳性对照组( 环磷酰胺， 40 mg /kg·bw) ，每隔24小时处死动物，计算微核千分率，嗜多染红细胞与成熟红细胞比值( PCE /NCE) 。

1． 3． 4 小鼠精子畸形试验

雄性昆明种小鼠( 25 ～35 g) 数量50 只，分成5 个小组，剂量分组同试验1． 3． 3。服用20 mL/kg·bw，1 次/日，连续5 日，自初始给药，第35 天后杀死所有动物。采用GB 15193． 7 －2003 标准，观察并记录精子畸形率。

1． 3． 5 30 天喂养试验80 只SD 大鼠( 62 ～ 88 g) ，按体重随机进行分组，雌雄各半，单笼饲养，期间饮水进食自由。设6. 60、3． 30、1． 65 g /kg·bw 这3 个不同的剂量组( 人体推荐用量的100、50 和25 倍) 。连续灌胃30 天，灌胃量为10 mL /kg·bw，每日1 次，观察动物平时活动、有无中毒或是死亡，并做好统计。试验结束禁食16 h 后称大鼠空腹体重，取动物血检测出血液学以及生化指标。对动物的肝脏、肾脾脏及睾丸( 卵巢)等组织解剖，完成病理学检查，计算脏器与体重比值。

1． 4 试验数据统计

实验数据用x－ ± s 表示( x－ 均数，s 标准差) ，根据SPSS17． 0 软件进行统计，卡方检验进行处理小鼠骨髓细胞微核试验结果，对小鼠精子畸形试验用秩和检验， 30 天喂养数据采用方差分析。

2 实验结果与分析

2． 1 大鼠急性毒性试验

大鼠灌胃给予26． 40 g /kg·bw 的复方德赢vwin登录 片后，生长正常、无中毒现象，2 周内无一例死亡，试验结束，大体观察解剖动物未见明显异常。根据急性毒性标准［13］，该样品属于无毒级。

2． 2 Ames 试验

表1 可见样品诱变试验结果为阴性。可见在本实验条件下，复方德赢vwin登录 片不会诱发突变。

2． 3 小鼠骨髓细胞微核试

相较于溶剂对照组，表2 各剂量组的骨髓细胞微核率未见统计学差异( P ＞ 0． 05) ，而阳性对照中雌雄两组均超过20‰。各小组PCE /NCE 值均符合正常值，且无显著性差异。上述结果显示: 样品对小鼠的骨髓细胞微核率的增加无影响。

2． 4 小鼠精子畸形试验

阳性对照组( 环磷酰胺， 40 mg /kg·bw) 的精子畸形率上升至6． 59% ± 0． 34%，低、中、高剂量组的畸形率远低于阳性对照组，分别为1． 82% ± 0． 17%，1． 83%±0． 21%，1． 81% ± 0． 33%，溶剂( 蒸馏水) 对照组为1. 81% ±0． 26%，试验组与之较为接近( P ＞ 0． 05) ，提示复方德赢vwin登录 片并不会诱导小鼠精子发生畸变。

2． 5 大鼠30 天喂养试验

2． 5． 1 动物一般情况

试验过程中，动物体重保持增长，各组中的大鼠均无中毒或死亡现象。由表3 可见，相较于溶剂对照组，各剂量组中的大鼠在初始、每周末以及空腹体重上，均无显著性差异( P ＞ 0． 05) 。同时，包括每周进食量、食物利用率、肝/体比值、肾/体比值等各项指标上，均无显著性差异( P ＞ 0． 05) ，提示复方德赢vwin登录 片不会对大鼠生长产生不利影响。

2． 5． 2 血液学及血液生化学结果

相较于溶剂对照组，各剂量组在检测出来的血液学指标上( 表4) ，无显著性差异( P ＞ 0． 05) ; 各组剂量组肌酐、血清尿素氮未见明显升高( 表5) ，提示在试验剂量内，样品未对肝肾功能产生不良影响。

2． 5． 3 组织病理学检查结果

溶剂对照组观察到轻度肝小叶空泡变雌雄各2例，样品高剂量组该病变为雌性2 例、雄性1 例，其余组织均未见异常。上述轻度肝小叶空泡变属动物自发轻度病变，无高剂量样品引起的动物中毒性损伤改变。

3 讨论

德赢vwin登录 的活性成分及作用均与肉苁蓉相似［14］，2005 年被中国药典收载可代替肉苁蓉入药，能有效缓解肉苁蓉药源的紧缺问题［1］，极具开发价值。复方德赢vwin登录 片中德赢vwin登录 含有苯乙醇苷类、苯丙素苷类和环烯醚萜苷类等主要成分［15］; 淫羊藿不仅含有主要活性成份淫羊藿苷，同时包含多糖、木脂素、生物碱、挥发油等多种物质［8］，两者再配伍牛磺酸、锌，多种活性组分混合提高疗效的同时，化学成分也并非简单加合，需考虑复配使用是否具有潜在的毒性作用以及靶器官损害。尽管单味药材提取物安全性已获证实，但复方德赢vwin登录 中多味中药与营养补充剂复配使用的毒理安全性目前鲜有研究。在本实验中，受试样品无急性毒性; 通过体外

Ames 试验系统，证明了样品对基因突变无诱发作用。同时，采用小鼠骨髓细胞微核试验、精子畸形试验，分别在体内造血细胞、生殖细胞水平上，更进一步证明样品无遗传毒性。在30 天喂养试验中，各项观察指标均未因样品发生异常改变，可见在受试剂量范围内，样品对试验动物的生长发育、造血功能、肝肾功能均无损害作用。因此，德赢vwin登录 、淫羊藿提取液配伍牛磺酸和锌服用具有良好的安全性，该研究为德赢vwin登录 保健品及制剂的开发提供了理论依据，对促进我国新疆德赢vwin登录 这一独特中药资源的利用及推广具有重要意义。

参考文献

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