马正文，樊琼玲，俞金秀，伊力孜热·伊力哈木，由淑萍

（新疆医科大学护理学院，乌鲁木齐830011）

摘要：目的探讨肉苁蓉苯乙醇总苷（CPhGs）对腹主动脉缩窄术（AAC）后心肌肥厚大鼠的作用及其作用机制。方法 将70只实验大鼠分为7组：正常对照组、模型组、假手米组、缬沙坦阳性药物组（8.3mg／kg）、模型＋CPhGs低剂量组（125mg／kg）、模型＋CPhGs中剂量组（250mg／kg）、模型＋CPhGs高剂量组（500mg／kg），各组10只。对模型组大鼠行AAC术，使大鼠腹主动脉管腔环形缩窄，构建心肌肥厚模型，术后每天灌胃给药1次，持续6周。各组以超声心动图检测大鼠心率（HR）、收缩期间隔厚度（IVSs）、左室收缩末期内径（LVESD）左室厚壁舒张期厚度（LVPWd）、射血分数（EF），碱水解法测量羟脯氨酸（HYP），苏木精-伊红（HE）染色观察心肌细胞的表型、数目、排列方式并进行比较。结果与正常对照组相比，模型组大鼠HR、IVSs、LVPWd、HYP均有不同程度增加（P均＜0.05），LVESD均有不同程度的降低（P均＜0.05）。与模型组相比，模型＋CPhGs低、中、高组大鼠HR、IVSs、LVPWd、HYP均有不同程度下降（P均＜0.05），LVESD、EF均有不同程度的升高（P均＜0.05），模型＋CPhGs高剂量组与缬沙坦阳性药物组各项指标差异均无统计学意义。结论 CPhGs可以抑制AAC术后心肌肥厚的发生，起到保护心肌的作用。

关键词：肉苁蓉苯乙醇总苷；心肌肥厚；羟脯氨酸

心肌肥厚是多种病理性刺激因素引起的适应性改变四，表现为心肌总量增加、心肌收缩力加强、心室壁厚度增厚等，作为高血压的严重并发症之一，如不对其进行及时干预，则会进一步发展为心率失常、心力衰竭甚至影响到生命。心肌肥厚已成为诱发脑卒中、冠心病等疾病的首要危险因素”。心肌肥厚的预防与治疗至关重要。肉苁蓉主要生长于新疆沙漠地区，因为药效切实被列为中国传统的中药材之中，且有“沙漠人参”之称叫，其主要化学成分有肉苁蓉苯乙醇总苷（cistanche phenylethanoid glycosides，CPhGs）、木 脂素类、生物碱、多糖等。肉苁蓉发挥药性作用的基础为CPhGs的生物活性作用，且CPhGs具有抗衰老、免疫调剂、促进体液分泌和降低心肌细胞损伤的功能。本课题组对大鼠行腹主动脉缩窄术（abdom-inal aortic constriction，AAC）构建心肌肥厚模型，研究CPhGs对AAC术后心肌肥厚大鼠射血分数（EF）、心率（HR）、收缩期间隔厚度（IVSs）、左室收缩末期内径（LVESD）、左室厚壁舒张期厚度（LVPWd）、羟脯氨酸（HYP）及心肌细胞的影响，旨在为心肌肥厚防治领域的发展提供新依据。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级SD大鼠，健康状况良好，体重180～220g，购于新疆医科大学动物实验室中心，动物生产许可证号：SYSK（新）2016-0003。

1.2 主要仪器 电子秤ACS-1.5A（上海友声衡器有限公司）、电热恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）；飞利浦HD 11 XE超生诊断仪（德国Philips公司）；酶联免疫反应检测仪（美国Therom Scientific公司）；电子显微镜（上海比目仪器有限公司）。

1.3 实验试剂 德赢vwin登录 提取物（购自win德赢官方 ），经高效液相色谱法（HPLC）法检测．CPhGs含量高达92.0％以上；缬沙坦（北京诺华制药有限公司）；戊巴比妥钠（德国Meck公司）；HYP试剂盒（南京建成生物工程研究所）；CMC-Na（西安正天药用辅料有限公司）；苏木素（Sigma公司）。

1.4 方法

1.4.1 分组 将大鼠分为7组：正常对照组、模型组、假手术组、缬沙坦阳性药物组（8.3mg／kg）、模型＋CPhGs低剂量组（125mg／kg）、模型＋CPhGs中剂量组（250mg／kg）、模型＋CPhGs高剂量组（500mg／kg）．每组10只。

1.4.2 心肌肥厚模型的建立 参照文献［7-9］对模型组大鼠行AAC术构建模型，以2.5％戊巴比妥钠2ml／100g腹腔注射麻醉大鼠，在无菌环境下于剑突下2-3cm处，腹正中切口切开皮肤，暴露腹腔，将腹部脏器一并推向右侧，在右肾动脉上方1.5cm处用两只弯镊剥离并充分暴露腹主动脉，取出置于生理盐水的7号针头，将针头与大鼠腹主动脉平行放置，再用4-0手术线一并结扎，随后抽出7号针头，剪去过长的手术缝线，手术后所有大鼠腹腔注射5000U青霉素防止感染，关闭腹腔。假手术组大鼠在手术时仅将腹主动脉分离，正常对照组不做任何处理。

1.4.3 实验受试物干预 手术次日后开始对大鼠进行药物干预，缬沙坦阳性药物组（8.3mg／kg）、模型＋CPhGs低剂量组（125mg／kg）、模型＋CPhGs中剂量组（250mg／kg）、模型＋CPhGs高剂量组（500mg／kg），灌胃给药，每天给药1次，持续6周。

1.4.4 超声心动图检查 末次给药24h后，麻醉大鼠后，于前胸及上腹部处备皮，打开超声诊断仪测定各组大鼠心功能指标：HR、IVSs、LVESD、LVPWd、EF。

1.4.5 标本的采集与制备 完成超声心动图检测后，处死大鼠，取出心脏，随机取样制成心肌匀浆测定羟脯氨酸（HYP）的含量；将采集好的心尖组织经固定、脱水、透析、HE染色后，把切片置于显微镜下观察。

1.4.6 各组大鼠心肌匀浆中HYP的含量检测 腹主动脉采血出处死大鼠后，打开胸腔，取出心脏，立刻使用清水冲洗心脏表面，直到冲洗干净后，擦干表面水分，取心尖组织部位，制成心肌匀浆测定HYP的含量，操作过程严格按照HYP试剂盒说明书操作。

1.4.7 显微镜下观察心肌肥厚细胞的病理学变化从4％多聚甲醛中取出固定好的心尖组织，用生理盐水冲洗除去固定液，洗净后逐级脱水处理，脱水后对其进行逐级透明，接着浸入纯石蜡中，等切片平坦后，用擦拭干净的载玻片从水中捞取，矫正位置，擦干多余的水分，HE染色后进行观察，心肌肥厚参照文献［10］，分为3级：1级，伴有部分心肌细胞数目减少、排列不规则不整齐；II级，心肌细胞形以肥大为主，绝大部分心肌细胞受损且排列散乱；皿级，单位视野内可见心肌细胞明显增大，排列散乱无序，严重者可出现心肌纤维化。

1.5 统计学方法 SPSS21.0软件进行统计学分析，计量指标用均数±标准差以（±）表示；通过单因素方差分析两两比较各组数据，组间比较采用LSD方法检验，检验水准α＝0.05。

2 结果

2.1 CPhGs对心肌肥厚大鼠HR的影响 模型组大

鼠HR［（525.9±35.9）次／min］高于正常对照组［（394.1±22.1）次／min］、假手术组［（401.9±19.0）次／min］（P均＜0.05）；模型＋CPhGs低、中、高剂量组HR［（499.5±38.2）、（469.7±41.6）、（428.0±36.1）次／min］明显低于模型组［（525.9±35.9）次／min］（P均＜0.05）。模型＋CPGs高剂量组HR与缬沙坦阳性药物组HR［（424.5±29.6）次／min］比较差异无统计学意义。

2.2 CPhGs对各组大鼠的心脏彩超指标的影响 与正常对照组和假手术组相比，模型组大鼠的1VSs、LVPWd升高，LVESD、EF降低（P＜0.05），与模型组相比，模型＋CPhGs各剂量组大鼠的IVSs、LVPWd降低.LVESD、EF升高，随着CPhGs剂量的增加各项指标越接近缬沙坦阳性药物组，其中模型＋CPhGs高剂量组与缬沙坦阳性药物组各指标比较差异无统计学意义。见图1、表1。

表1 CPhGs对心肌肥厚大鼠的心脏彩超指标的影响

注：与假手术组比较，”P＜0.05；与模型组比较，“P＜0.05。

模型＋CPLGs中剂量组

模型＋CPhGs低剂量组                  模型＋CPbGs高制量组

图1 各组大鼠超声心动图

2.3 CPhGs对心肌肥厚大鼠心肌匀浆HYP含量的影响 模型组大鼠的心肌匀浆中HYP的含量明显高于正常对照组［（0.14±0.014）μg／mgl与假手术组［（0.15±0.013）μg／mg］（P均＜0.05）；阳性药物组大鼠心肌匀浆HYP的含量相对模型组明显下降（P＜0.05）；模型＋CPhGs低、中、高组各组大鼠心肌匀浆中HYP水平［（0.22±0.013）、（0.19±0.020）、（0.18±0.016）μg／ mg］与模型组（0.25±0.014）μg／mg相比均有不同程度下降，且随CPhGs剂量的增加心肌匀浆中HYP的含量下降越明显，其中模型＋CPhGs中、高剂量组HYP的含量明显减少，与阳性药物组［（0.17±0.011）μg／mg］差异均无统计学意义。

2.4 心肌组织病理学观察结果 模型组心肌组织切片镜下表现：心肌细胞数量明显减少，细胞表型为肥大，且细胞的排列方式杂乱无序；与模型组相比模型＋CPhGs低、中、高剂量组细胞数目有不同程度的增加，且细胞排列整齐，其中模型＋CPhGs中、高剂量组与缬沙坦阳性药物组差异均无统计学意义。见图2。

  正常对照组                                      假手术组                                             模型组                   顺沙坦阳性药物组

模型＋CPhGs低剂量组    模型＋CPhGs中剂量组    模型＋CPhG-高剂量组

图2 各组大鼠心肌组织病理学观察（HE染色20x10）

3 讨论

心肌肥厚的早期是代偿性和适应性的，但长期进展会导致心肌及周围血管的纤维化，发生失代偿，使心率衰竭和猝死的发生率增加。肉苁蓉中的CPhGs具有抗衰老、免疫调剂、促进体液分泌和降低心肌细胞损伤的功能。本实验以AAC术构建心肌肥厚大鼠模型，使用CPhGs对模型组大鼠进行干预，研究CPhGs逆转心肌肥厚的作用机制。

HR是心脏功能的重要参数，是反映心脏基础功能的指标，具有测量方式简单且易行的优点。本研究结果显示，与模型组相比，模型＋CPhGs各剂量组中大鼠HR有不同程度的下降，且本实验发现CPhGs高剂量组大鼠HR变化最显著，这与既往研究结果相似”。这可能与在建模后期，鼠发展为失代偿性心力衰竭有关。研究报道，建模4周即可发生心肌肥

厚叫，本研究在建模后进行了时长6周的干预。AAC术，是一种压力超负荷模型构建方法，其通过缩窄腹主动脉，增加心脏后负荷，使心肌发生代偿性肥厚、心室容积增加和心脏扩大。模型后期出现失代偿，发生心力衰竭。CPhGs在一定程度上能起到改善心肌表面硬度和张力的作用，能够有效减缓心肌肥厚的发生。

IVSS.LVESD.LVPWd、EF等是超声心动图指标，是反映心肌肥厚、心功能的敏感指标，对心肌肥厚大鼠心脏泵血能力、心腔容量、心肌厚度的判断具有重要的临床意义，相关文献表明IVSs、LVPWd的增加和LVESD、EF的降低，提示心室壁增厚，心腔内径缩小，常发生在心肌纤维化合并心功能严重损失等情况。本实验发现，与正常对照组相比，模型组大鼠的IVSs、LVPWd显著升高.LVESD、EF明显下降，则表明大鼠心腔容量缩小、心肌厚度增加。与模型组相比，模型＋CPhGs各剂量组中大鼠IVSs、LVPWd明显降低，LVESD、EF明显升高，其中，CPhGs高剂量组大鼠IVSs，LVPWd下降和LVESD、EF上升最为显著，提示CPhGs能起到改善心功能、心腔容量和心肌组织的功能。

目前国内外广泛使用HYP含量表示胶原组织的代谢程度。本实验发现，与正常对照组相比，模型组大鼠HYP的含量明显增多；与模型组相比，模型＋CPhGs各剂量组中大鼠HYP含量均有不同程度的降低，CPhGs高剂量大鼠HYP含量减少的最为明显，提示CPhGS能有效降低大鼠心肌组织HYP的含量，起到减轻心脏负荷的作用。

心肌细胞数目、表型、排列方式是病理学观察的主要指标。本实验显示，与模型组相比，模型＋CPhGs各剂量组大鼠切片中细胞数目均有不同程度的增加，排列有序，且心肌纤维化的程度均有不同程度的降低，其中模型＋CPhGs（500mg／kg）剂量组基本看不到纤维化的心肌组织，提示CPhGs能起到保护心肌细胞、维持细胞正常形态、减轻心肌纤维化的功能。

综上所述，CPhGs能降低AAC术后大鼠的HR、IVSs、LVPWd、HYP，增加LVESD、EF。随着CPhGs剂 量的变化，逆转心肌肥厚的效果随之发生改变，呈现出剂量与效果正相关的关系，其中模型＋CPhGs（500mg／kg）剂量组与阳性药组相比，各项指标接近。提示CPhGs可以抑制AAC术后心肌肥厚的发生，起到保护心肌的作用。