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（1上海商学院食品系，上海 200235：2上海市生物医药技术研究院，国家卫生健康委员会计划生育药具重点实验室，上海 200032；

3阿拉善盟尚容源生物科技股份有限公司，内蒙古巴彦浩特 750300；4上海理工大学医疗器械与食品学院，上海 200082）

摘 要：现代药理研究表明，内苁蓉具有抗疲劳、抗衰老、调节分法代谢等作用。肉苁蓉醇提物对肾虚小鼠的作用研究多集中表现在激素水平，但未见对小鼠糖代谢的研究报道。为探究苁蓉醇提物对小鼠肾虚和糖代谢水平的影响，建立肾虚小鼠和糖尿病小鼠模型，连续灌胃21d后，检测肾虚小鼠血清激素水平，测定酶活力，取睾九组织进行石蜡包埋切片和HE染色，观察其病理学状态。检测糖尿病小鼠体重、空腹血糖和总蛋白变化情况。结果表明：醇提物可使肾虚小鼠的体重增加，灌胃给药组超氧化物歧化酶（SOD）活力降低，显示醇提物有调节清除自由基的作用（p＜0.001）；组织切片显示，肉苁蓉灌胃给药组的生精小管内精子数增多，表示醇提物使肾虚小鼠的生精能力提高。低剂量醇提物可显著降低雌性糖尿病小鼠的血糖水平（p＜0.05），醇提物可调节糖尿病造成的总蛋白水平异常（p＜0.05）。因此，肉苁蓉醇水提取物对雄性肾虚小鼠模型具有生殖改善作用，同时对糖尿病小鼠模型的血糖水平有一定的影响。

关键词：荒漠肉苁蓉；氢化可的松；肾虚；降血糖

中图分类号 R285.5    文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2021）13-0023-06

肉苁蓉产自我国西部地区沙漠地带，是一种特殊的寄生植物，含有多种活性成分，如苯乙醇苷类、环烯醚萜类、木脂素类、多糖、氨基酸、生物碱、微量元素（～等。相关研究显示，肉苁蓉除了具有调节内分泌国、抗疲劳、润肠通便、神经保护等作用之外，还可以起到雄性激素的作用”。目前，关于肉苁蓉醇提物对肾虚小鼠的作用研究主要集中于激素水平，且国内外未见研究醇提物对小鼠血糖水平的影响，只有少数研究报道包含肉苁蓉的复方药剂具有降糖作用。2018年4月，国家卫计委将肉苁蓉（荒漠）列为药食同源的物质，大大增加了其市场与临床应用的潜力，但目前市场上关于肉苁蓉的功能产品还不是非常知名，人们对于肉苁蓉的认识并不多，主要产品仍为肉苁蓉酒、茶包一类。随着中医不断被国人所重视，中药的相关基础研究也显得尤为迫切。肉苁蓉作为我国传统的名贵中药，具有广泛的研究价值和开发应用的潜力。

本研究拟建立氢化可的松诱导的雄性肾阳虚小鼠，记录小鼠自灌胃肉苁蓉后的体重变化，测定血清激素水平和组织酶活力，对小鼠睾丸组织进行病理研究来探究肉苁蓉对肾虚小鼠的影响。建立链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠模型，检测小鼠自灌胃肉苁蓉后的体重和空腹血糖变化，以及血浆总蛋白含量，以探究肉苁蓉对小鼠糖代谢的影响，以期为肉苁蓉这一药食两用的植物资源的研究开发提供试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 C57BL／6J雄性小鼠和ICR小鼠，购自上海西普尔-必凯实验动物有限责任公司；链脲佐菌素，上海源叶生物公司；氢化可的松，上海源叶生物公司；野生荒漠肉苁蓉，内蒙古自治区阿拉善地区；戊巴比妥钠，Sigma公司；小鼠游离血清睾酮（T）酶联免疫试剂盒、小鼠血清促性腺激素释放激素（GnRH）试剂盒和丙二醛（MDA）酶联免疫吸附测定试剂盒，均购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，南京建成有限公司；伊红溶液（B液），上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司：苏木素溶液，上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司；通用型组织固定液，武汉赛维尔生物科技有限公司；食用乙醇，江苏省华兴生物科技有限公司。

1.2 仪器与设备 MS32000LE电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；TDL-5-A离心机，上海安亭科学仪器厂；HH-S恒温水浴锅，江苏国胜实验仪器厂；RE-5299旋转蒸发仪，上海况胜实业发展有限公司；-80℃低温冰箱，HARRIS公司：酶标仪（MR3），赛默飞世尔（上海）仪器有限公司；欧姆龙血糖仪HGM-121，苏州尔达医疗设备有限公司。

1.3 方法

1.3.1 肉苁蓉提取物的制备 挑选新鲜的肉苁蓉，切片，取100g粉碎，粉碎时以料液比1：2加入蒸馏水，打成糊状匀浆，置于冰箱冷冻存放备用。将肉苁蓉匀浆和52％的食用酒精按1：16的比例混合，65℃水浴加热46min，8000r／mm离心5mm后将滤渣加入同第1次等量的酒精水溶液。同等条件再次水浴加热，2次加入的乙醇水溶液共计10000mL，将2次离心出的上清液进行浓缩，使乙醇蒸发出来，浓缩条件为旋转蒸发仪85℃加热50min，得到2200mL浓缩液，即为肉苁蓉醇提取液。

1.3.2 动物模型建造及分组

1.3.2.1 肾虚小鼠动物模型 6周龄的C57BL／6J雄性小鼠引进后适应性饲养7d，随机选取5只小鼠作为空白对照组，每天进行灭菌生理盐水皮下注射，0.1ml／只，1d1次，连续10d。其余26只小鼠用氢化可的松皮下注射造模，按照25mg／kg BW（体重）的剂量连续注射10d］。小鼠如果有拱背蜷缩、肢尾冷、精神不振等肾虚症状，则认为氢化可的松诱导雄性小鼠肾虚模型造模成功。

肾阳虚小鼠模型建造成功后，空白组和模型组给予等体积的蒸馏水灌胃，低剂量组和高剂量组分别按药物临床用药量的1倍，2倍计算．1d灌胃1次，连续灌胃21d。具体分组情况为：CO空白组（5只），以0.4ml／（kg·BW）的灌胃剂量灌服纯水；MO模型组（8只）：以0.4ml／（kg·BW）的灌胃剂量灌服纯水；M1低剂量组（9只），灌胃剂量为1.6ml／（kg·BW）的肉苁蓉醇提取液；M2高剂量组（9只），灌胃剂量为3.2ml／（kg·BW）的肉苁蓉醇提取液。

1.3.2.2 糖尿病小鼠模型 8周龄ICR雌性小鼠20只，雄性小鼠21只。雌雄小鼠分别随机分为：空白组（CO），模型组（MO），肉苁蓉低剂量组（M1），肉苁蓉高剂量组（M2），每组各5只或6只，每组灌胃剂量同肾虚组。除空白组（CO）外，其余小鼠8周龄开始每日喂高脂饲料，喂28d后（11周龄）注射链脲佐菌素［120mg／（kg·BW），造模前将ICR小鼠禁食12h。72h后采血测定空腹血糖（前一晚动物禁食）。第1次测血糖未达标，12周龄重复1次实验（注射时间点、剂量均一致），空腹血糖＞11.1mmol／L视为糖尿病动物模型造模成功。

1.3.3 主要检测指标的测定 每周测量小鼠的体重，每周对ICR小鼠剪尾取血，用血糖检测系统测定空腹血糖水平，并比较各组差异。灌胃实验结束后，心脏采血，血液以3500r／min离心15min。血清分离后，用ELISA法检测C57BL／6J小鼠血清中睾酮（T）、促性腺激素释放激素（GnRH）的激素水平。小鼠断头处死后，速取睾丸组织，称重，以组织重：生理盐水（mgmL）＝1：0.9．离心15min，组织上清液冷冻保存备用，酶联免疫吸附测定睾丸组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）酶活力，操作均严格按照试剂盒说明进行。ICR小鼠每组抽取3～4个样品取其血浆送往上海实验动物研究中心，对总蛋白水平（TP）进行检测。