摘要：本研究建立了紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质（以没食子酸计）含量的方法。当乙醇浓度为70%、温度为60℃、提取时间为30min、料液比为1：20时，肉苁蓉中多酚类物质（以没食子酸计）的提取效果最好。同时肉苁蓉样品中多酚类物质（以没食子酸计）的平均质量百分比为0.2422%。精密度、稳定性和加标回收结果显示该方法可行可靠。

关键词：肉苁蓉；紫外-可见光分光光度法；多酚类物质；没食子酸

肉苁蓉素有“沙漠人参”之美誉，它具有改善性功能障碍、抗衰老、抗疲劳、抗阿尔兹海默症等效用[1]，具有极高的药用价值，是中国传统的名贵中药材。同时肉苁蓉还可入菜，李保定研究出具有独特风味的肉苁蓉炖鸡滋补类菜肴[2]。主要产于甘肃、新疆等地。

植物单宁，又称植物多酚，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，是植物的次生代谢产物，大部分存在于植物的果皮中[3]。多酚具有抗病作用、抗衰老、抗氧化、抗癌防癌、抗诱变、抗病毒、抗微生物、减缓骨质疏松、健齿、降血脂和血糖等很多方面具有良好的作用。植物总多酚常用的含量测定方法有高锰酸钾法、紫外-可见光分光光度法、原子吸收光度法、化学发光发等[4]，本实验对紫外-可见光分光光度法进行了研究，以没食子酸为标准品，确定了肉苁蓉提取的最佳条件（乙醇含量、料液比、提取时间、提取温度），并对肉苁蓉中多酚的含量进行了测定。

1 仪器与试剂

仪器：756型紫外-可见分光光度计（上海旦鼎国际贸易有限公司）、1cm石英比色皿（宜兴创新光学玻璃有限公司）、KH3200DB 数控超声波清洗器（上海双旭电子有限公司为）、HH-4数显恒温水浴锅（聚创环保）、电子天平（梅特勒-托利多）、TG16高速台式离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）。试剂：肉苁蓉（甘肃省酒泉市瓜州县）、没食子酸（标准品，sigma公司）、无水乙醇、Folin-酚试剂、碳酸钠，均为国产分析纯。

2 实验方法

2.1 溶液的配置

2.1.1 没食子酸标准储备液的配制

准确称取0.2500g 没食子酸，先用5mL 乙醇进行溶解，再用蒸馏水准确定容至50mL（现配），浓度为5000mg/L；

2.1.2 没食子酸工作液的配制

分别准确移取没食子酸标准储备液0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL至25mL容量瓶中并用蒸馏水进行定容。浓度分别为：0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0mg/L。

2.1.3 肉苁蓉供试品溶液的制备

将在阴暗通风处进行自然风干的肉苁蓉原料进行粉碎后过40目筛。然后准确称取粉末状肉苁蓉样品1.0000g，先用25ml乙醇（70％）进行初步溶解，再在水浴（60℃）中进行超声提取，提取时间为20min，料液比为1：30，最后定容至50ml。

2.2 工作曲线的绘制

测定方法为Folin-酚[5]法，具体操作如下：分别吸取0.5mL不同浓度的没食子酸工作液加入到50mL容量瓶中，分别加入30mL蒸馏水混合、2.5mL的Folin-酚试剂，混匀；5min内加入7.5mL质量分数为20％的Na2CO3溶液，混合并定容至50mL；将上述配置的溶液在20℃下放置2h后，在760nm下测定吸光值[6]。然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，见图1，得到线性回归方程Y=0.3372X+0.1992，R2=0.9925。

3 实验结果与讨论

3.1 肉苁蓉中多酚类物质提取条件的优化

3.1.1 乙醇含量的确定

多酚类物质极易溶于乙醇溶液中，所以分别用50％、70％和90％的乙醇溶液作为提取液，考察乙醇含量对多酚类物质的提取的影响。测定结果见图2，由图可知，当温度为60℃，提取时间为30min，料液比为1：20 时，乙醇含量为70％时，提取效果最好。

3.1.2 提取温度的影响

温度对物质的溶解度有较大的影响，所以以温度25℃、60℃、90℃为变量，确定最佳的提取温度。测定结果见图3，由图可知，当乙醇含量为70％，提取时间为30min，料液比为1：20 时，60℃提取效果

最好。

3.1.3 料液比的选取

选择合适的料液比能使提取液发挥最大的效用。故本实验选择1：20、1：30、1：40的料液比进行实验。测定结果见图4，由图可知，当乙醇含量为70％，提取时间为30min，温度为60℃时，料液比为1：20、1：30和1：40的测定结果差别不大，本着节省原材料的原则，故料液比选择为1：20时较好。

3.1.4 提取时间的确定

溶解速度的快慢决定着提取时间的大小，为使溶解充分，需确定最佳提取时间，分别以10min、20min、30min为提取时间进行实验，测定结果见图5，由图可知，当乙醇含量为70％，料液比为1：20时，温度为60℃时，30min效果最好，提取时间为30min

为最佳提取时间。

3.1.5 肉苁蓉中多酚提取最佳条件的确定分别以乙醇含量（50%、70%、90%）；温度（25℃、60℃、95℃）；提取时间（10min、20min、30min）；料液比（1：20、1：30、1：40）为因素进行L9（34）单因素实

验，以确定最佳提取条件。实验发现：当乙醇浓度为70%、温度为60℃、提取时间为30min、料液比为1：20时，提取效果最好。

3.2 肉苁蓉中水分含量的测定

测定肉苁蓉多酚含量时，需同时测定样品中水分含量，以便计算绝干样中的多酚含量。

（1）取一只称量瓶洗干净，烘干备用。

（2）称肉苁蓉1.0000g左右于称量瓶内，将不盖盖子，称肉苁蓉和称量瓶的质量，将其放入恒温干燥箱内放置1小时，温度设为105℃。

（3）取出放入干燥器内冷却至室温后，用同一台天平调零后称量干燥后的质量。

（4）水分含量%＝m前-m后/m肉苁蓉×100%3.3 肉苁蓉中多酚含量的测定取肉苁蓉供试品溶液1mL 到25mL 的容量瓶中，加2.5mL 的Folin-酚试剂，再加7.5mL 20％的Na2CO3混匀，蒸馏水定容至标线，放置2h后进行测

定，测定结果见表5。

3.3 紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质的方法评价

3.3.1 精密度实验

对紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质进行精密度实验，同一肉苁蓉供试品溶液平行测定6 次，测定结果见表6，相对标准偏差为0.4804%，表明该试验方法独立测量结果一致程度较高，随机误差较小。

3.3.2 稳定性实验

对紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚类物质进行稳定性实验，同一肉苁蓉供试品溶液每间隔1h测定1次，重复测4次，测定结果见表7。相对标准偏差为0.9333%，表明该方法仪器的计量特性随时间不变化的能力较好，能够满足实验对稳定性的要求。

3.3.3 加标回收实验

准确量取已知含量的肉苁蓉供试品溶液0.5mL3 份，分别加入7 号的没食子酸工作液（2.0mg/L）11mL、12mL、13mL，加2.5mL 的Folin-酚试剂，再加7.5mL 20％的Na2CO3混匀，蒸馏水定容至50mL，放置2h后分别进行测定。测定结果见表8，由实验结

果可以看出加标回收率分别为99.54%、98.46%、100.8%，平均回收率为99.65%，结果显示该方法准确度较高，可以用于肉苁蓉中多酚类物质的测定。

4 结论

针对尚未有关于甘肃河西地区肉苁蓉中多酚提取实验的优化及含量的测定研究，本文建立了紫外-可见分光光度法测定肉苁蓉中多酚的提取及含量测定的方法。通过对结果精密度、稳定性和加标回收等方面的实验，发现精密度测定结果的RSD达到0.4804% ，稳定性测定结果的RSD 达到0.9333%。加标回收的回收率达到99.65%，本实验方法操作简单，可靠可行。

参考文献

[1] 汪燕平，余新忠，宋元.以降本草书写与地道药材建构讨论[J]，安徽大学学报，哲学社会科学版2018，3：92-101.

[2] 李保定，肉苁蓉炖鸡风味形成研究[J]，中国调味品，2017，42（4）：96-102.

[3] 石碧，狄莹.植物多酚[M].北京：科学出版社，2000：19.

[4] 雷昌贵，陈锦屏，卢大新等.食品中多酚化合物的测定方法及研究进展[J]，食品与发酵业，2007，33（1）：100-104.

[5] 王德吉，田笠卿，王连生.原子吸收在有机化学中的应用（Ⅲ）：茶叶中单宁的测定[J].高等学校化学学报，1995，16（4）：536-539.

[6] 赵萍，王雅，王晓明等.锁阳多酚类物质的提取及抗氧化性研究[J]，学术论坛.CFI（12）DEC 2009.46-48.