药用肉苁蓉花粉的形态观察研究

周奕嘉＇，陆 敏2，骆前飞＇，李西林”

（上海中医药大学1．中药学院；2．科技实验中心，上海201203）

摘要 目的：对《中国药典》规定的2种肉苁蓉的花粉进行形态学研究，为内苁蓉属植物的分类鉴别建立实验依据。方法：采用扫描电镜观察荒漠肉苁蓉和德赢vwin登录 的花粉形态并进行测量。结果：两种肉苁蓉的花粉粒在形状，萌发孔及外壁纹饰等方面具有其各自特殊的形态结构特征。结论：孢粉学研究可作为鉴别肉苁蓉属植物的分类鉴别依据。

关键词 荒漠肉苁蓉；德赢vwin登录 ；花粉形态；扫描电镜

肉苁蓉属植物在全世界共有22种，分布于欧、亚洲温暖的干燥地区。在国有5个种，主要分布于内蒙古、宁夏、甘肃、青海以及新疆等地。肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠通便的功效，是历代补肾壮阳的方剂中使用频率最高的一味药，有“沙漠人参”的美誉。

肉苁蓉属于寄生植物，通常寄生于梭梭、柽柳等沙漠植物的根部。2020版《中华人民共和国药典》收载的药材，来源于肉苁蓉属的两种植物，即荒漠肉苁蓉（Cistanche deserticola Y.C.Ma）和德赢vwin登录 （Cistanche tubulosa（Schenk）Wight）的干燥带鳞叶 肉质茎。长期以来，肉苁蓉属植物形态结构相似，其分类一直处于较为混乱的状态。目前对肉苁蓉的分类研究报道主要集中在两种方法上，一种是采用性状和生物显微鉴别法，通过观察其肉质茎横断面维管束及其排列方式来进行判断，另一种是采用高效液相色谱法，通过对不同来源物种的化学成分进行分离鉴定，以苯乙醇苷类、寡糖酯类、环烯醚萜及其苷类等主要化学成分的差异进行判断。花粉作为携带遗传信息的雄性生殖细胞，在长期的进化过程中往往形成独特的形态特征，并具有很强的遗传保守性和稳定性，因此可作为植物分类、鉴定的重要依据 ，但迄今为止对肉苁蓉的孢粉学研究报道较少。本研究从产地采集到两种肉苁蓉植物的新鲜花，采用扫描电镜，对其花粉形态进行观察、测量并加以分析总结，以期为肉苁蓉属

其他植物的分类和鉴别提供科学依据。

1 实验技术与方法

1.1 仪器

EM ACE600 离子溅射镀膜仪（德国，Leica）、Quanta FEG250场发射扫描电镜（美国，FEI）。

1.2 材料

荒漠肉苁蓉采自内蒙古阿拉善盟，德赢vwin登录 采自新疆于田县，原植物经北京大学药学院屠鹏飞教授鉴定，所有实验材料均留存于本校科技实验中心电镜室。

1.3 方法

取新鲜花粉直接涂抹于贴有导电胶的样品台上，用洗耳球吹尽多余松散的花粉，再将样品台放人Leica EM ACE600离子溅射镀膜仪中喷金镀膜，厚度为22nm，之后用FEI Quanta FEG250场发射扫描电镜进行观察，加速电压为10kV．分别选取具有代表性的视野观察花粉粒整体、赤道面、两极的局部形态及纹饰特征，并进行拍摄。

花粉粒极轴长和赤道轴长的测量：在3000倍的放大倍率下选取30粒花粉粒进行大小测量，以极轴长和赤道轴长（PxE）表示，极轴长和赤道轴长之比（P／E）表示花粉粒形状：P／E＞1.6为长椭球形；P／E在1.3-1.6之间为椭球形；P／E＜1.3为类球形。

统计分析：采用SPSS 17.0对所得到的数据进行统计分析，结果以平均值±标准差（x±s）表示.p＜0.05代表具有显著性差异。

2 结果

2.1 荒漠肉苁蓉花粉形态观察

镜下可见荒漠肉苁蓉的花粉呈长椭球形，两极较尖，赤道面观长椭圆形，极面观呈3裂圆形：大小为36.7（31.0-38.7）μmx19.4（15.5-22.5）μm：3 沟，沟膜具颗粒状突起，常聚集成团：外壁具皱波融合形成的细网状纹饰，并具有直径约0.35μm的小穿孔（见表1．图1）。

2.2 德赢vwin登录 花粉形态观察

镜下可见德赢vwin登录 的花粉粒呈长椭球形，两极较平，赤道面观长椭圆形，极面观3裂圆形，在界沟极区突起，大小为40.6（35.2～44.4）μmx20.6（19.0～22.5）μm：3沟，沟膜具分布不均匀的颗粒状突起，常不聚集成团：外壁具细网状纹饰，穿孔小且不明显（表1．图2）。

表1 花粉形态特征测量结果

Table 1 Measurement results of pollen morphological characteristics

注：2种肉苁蓉极轴比较。p＜0.05．P-极轴长：E-赤道轴长。

Notese Polar asis comparison of te kinde of cistance,pe0.05.Pength of pelar anie Eeugth of epuatorial asie

3 讨论

在我国分布的肉苁蓉属植物的分类一直较为混乱，何松春等将其分为6种，刘国钧“将其分为8种，而普遍被认同的观点是将我国肉苁蓉属植物分为5个种，即肉苁蓉（又名荒漠肉苁蓉），德赢vwin登录 、盐生肉苁蓉、白花盐苁蓉和沙苁蓉。

本实验采用扫描电镜法对《中国药典》收载的

图2 德赢vwin登录 花粉形态。

a．花粉形态，Bar＝200μm；b．花粉赤道面观，Bar＝50μm：c．花粉外壁纹饰，Bar＝20μm；d．花粉极面观．Bar＝20μm。

Fig.2 Observation of pollen morphology of Cistanche tmbulosa under seanning electron microscope.

a.Pollen morphology;b.Pollen equatorial view,e.Pollen estine sculpture;d.Pallen pole view

药用肉苁蓉的两个基源种植物的花粉形态进行观察，结果表明两种植物的花粉粒形态结构相似，赤道面观均呈长椭圆形，极面观呈3裂圆形，均具3沟，沿极轴方向分布，沟长几乎达两极，外壁可见颗粒状突起，表面均具细网状纹饰。但两者之间也具有明显的种间特异性。从花粉粒形状上看，荒漠肉苁蓉更趋向于纺锤形，两极较为尖锐：德赢vwin登录 多呈椭圆形，两极较为平坦。观察萌发沟可以发现，荒漠肉苁蓉的萌发沟大多近闭合，故赤道面观呈三裂状圆形，裂深较浅；德赢vwin登录 的萌发沟两端开口，由此可见其内部成片的颗粒状纹理，且赤道面观的裂深较深。比较两者的外壁纹饰，荒漠肉苁蓉外壁表面可见较多的小穿孔，呈直径约0.35μm的类圆形，或呈短轴0.35～0.53μm、长轴0.53～0.70μm的类长椭圆形．偶见2-3个小穿孔聚集而成的不规则形穿孔，沟膜处有时可见聚集成团的颗粒状突起：德赢vwin登录 外壁表面较致密，穿孔极小面密集，常连接成“人”字形线状凹陷，表面具有分布不均匀的颗粒状突起，且多为散在。

通过SPSS 17.0分析显示，德赢vwin登录 极轴明显长于荒漠肉苁蓉，p值为0.013，＜0.05．统计学显示两者具有显著性差异。但统计两者在赤道轴长、P／E值、萌发沟长等数据，分别为0.398、0.301、0.542，均＞0.05，无明显差异，不具有统计学意义。这些结果表明两种不同来源的肉苁蓉花粉在形状、萌发孔及外壁纹饰等方面具有其各自特殊的形态结构特征，本实验通过采用扫描电镜对肉苁蓉属中的二种药用植物的花粉形态研究，为进一步建立并闸明肉苁蓉属近缘种植物的分类提供一种方法借鉴。

除了《中国药典》收载的两种肉苁蓉之外，在我国还分布着同属的三种植物：盐生肉苁蓉（C.salsaC.A.Mey.G.Beck）、白花盐苁蓉（C.salsa tar. albiflora P.F.Tu et Z.C.Lou）和沙苁蓉（C.sinensis G.Beck），但因其资源稀少，产量不足，尚不能作为药用。本研究将搜集该三种肉苁蓉花粉粒进行进一步比较研究，为其种的分类和鉴定提供孢粉学实验依据-）