栾朝霞

（江苏警官学院，江苏南京210031）

摘 要：为优化大孔树脂纯化内苁蒙多酚提取物的工艺条件，通过静态吸附与洗脱试验师选合适的大孔树脂型号，并研究其吸附等温与吸附动力学模型后，采取动态吸附与洗税单因素实验确定最佳纯化工艺条件，同时进行动物的抗运动性疲劳研究。实验结果表明，HPD-400大孔树脂的吸附等温方程符合langmair模型，吸附量随温度升高而降低，且符合准二级动力学吸附过程。采用大孔树脂纯化内苁蓉多酚提取物的最佳工艺条件为：配制体积60mL，6mg／mL上样溶液，以2mL／min流速上样至HPD-400大孔树脂饱和吸附后，采用体积为180mL，60％乙醇溶液，以1mL／min流速洗脱，提取物中内苁蒙多酚纯度由20.12％提高至42.63％。与空白对照丝相比，不同制量的肉苁蓉多酚纯化产物可显著延长小鼠游泳力竭时间（P＜0.05，P＜0.01），星著增加体内肝糖原、肌糖原含量与乳酸脱氢酶活力（P＜0.05，P＜0.01），并有极显著降低乳酸浓度水平（P＜001），国此可较好地缓解体疲劳，从而为肉苁蓉多酚化合物的后续开发利用提供参考。

关键词：肉苁蓉，多酚，提取物，纯化，扰运动性疲劳

Purification and Anti-motor Fatigue

Effect of Total Polyphenols from Cistanche Extraction

LUAN Zhao-xia

(Jiangsu Palice Institute,Nanjing 210031,China)

Abstract:To optimize the purification procew condition of teal polyphenole of eatract from Citanche by macroporot resin,the HPD-400 macroporous resin type was chosen through static adsorption-desorption experiments,meanwhile,isothermal adsorption model and adsorption kinetics model of the resin wew furthermore iwestigated and then anti-motor fatigue of animal experiment was carried out.The results showed that equilibrium adsorption data of HPD-400 macroporous resin for total polyphenols were fined langmur isctherm equation,the adsorption decmae with the increaing of temperature,and the kinetics fitted the quasi-second-order kinetics equation The optimum purification process conditions were as follows:the initial concentration in sample solution 6mg/ml.,flow rate 2 ml/min,Icading sample volume 60 ml.,and 60%(v/v)ethanol 180ml. was used as eluent with flow rate of 1 ml/min After purification,the purity of total polyphenols in product was increased from 20.12% to42.63%.Compared with the blank control group,the groups of polyphenols of Cisanche at all doses significantly prolonged weight-loaded swimming time of mices(P<0.05,P<001),abviously improved activity of lactie dehydrogenase and storage of hepatic glycogen and muscle glycogrn in io(P<0.05,P<0.01),decreased lactic acid level after sporting (P<0.01).Therefore,polyphenols of Cistanche could enhanced sporting stamina and had good resisting movement fatigue effect,the study could provide reference for its subequent development and exploitation.

Key words:Citanche:polyphenols;etact:purification;anti-motor fatigue

文章编号：1002-0306（2020）15-0059-06

中图分类号：TS201.1 文献标识码：A

doi:10.13386/j.issm1002-0306.2020.15.010

引文格式：栾朝霞．肉苁蓉总多酚纯化工艺及其抗运动性疲劳作用研究．食品工业科技，2020.41（15）：59-64．

肉苁蓉为列当科植物肉苁蓉的干燥带鳞叶肉质茎，长期服用具有“补精益血”之功效，被卫计委认定为药食同源品种。由于该植物含有多糖、多酚、生物碱、维生素及多种矿物质等营养成分，因而近年在药品和食品领域应用较多。王丽卫等“研究发现肉苁蓉可明显改善胃肠道的消化功能：Yang等另发现其可加强骨矿物质密度；而王小新、陈志豪等曾分别对肉苁蓉的抗疲劳作用进行探讨，但没有研究具体活性成分的作用。多酚化合物通常具有抗氧化、增强机体免疫及抗衰老等生理活性，而对作用的研究却鲜有报道。因此，本研究利用大孔树脂具有选性高、干扰因素少、可重复循环利用的特点-，在提取肉苁蓉多酚物质的工艺基础上，探讨大孔树脂对其纯化的最佳工艺条件，并通过相关动物实验观察其体内抗运动性疲劳的作用效果，为肉苁蓉资源的后续开发和利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试验动物 健康雄性小鼠50只（动物许可证号：SYXK（苏）2019-0030），体质量10～18g，由江苏省实验动物中心提供，生长环境温度20～25℃，相对湿度50％～70％：肉苁蓉 安徽亳州药材市场，经鉴定为列当科肉苁蓉属植物肉苁蓉：没食子酸标准品 Sigma公司：Folin-酚试剂、无水乙醇、碳酸钠 均为分析纯国药集团化学试剂有限公司：乳酸（BLA）、乳酸脱氢酶（LDH）、肌糖原（MG）和肝糖原（HG）检测试剂盒 南京建成生物工程研究所：试验用水 为去离子水。

WK-40型药材粉碎机 青州迈德森制药机械厂：UV759S型紫外-可见分光光度计 上海精密科学仪器有限公司：FA1004B型电子天平 上海越平科学仪器有限公司：NKA-2、HPD 100、HPD 300大孔树脂 北京英莱克科技发展有限公司：AB-8、HPD400树脂 合肥四峰生物科技有限公司：1ab-1A-50E型冷冻干燥机 北京博医康实验仪器有限公司：SHZ-82型水浴恒温振荡器 常州国旺仪器有限公司：小鼠恒温游泳池 上海艾研生物科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 多酚提取物制备 将干燥后的肉苁蓉完全粉碎后，过80目筛，准确称取20g，加入400mL．70％乙醇溶液，在60℃温度下回流提取30min后过滤，提取两次，合并滤液减压回收乙醇后，冷冻干燥备用叫。

1.2.2 树脂型号选择

1.2.2.1 树脂预处理 将大孔树脂浸泡于90％乙醇中24h，充分溶胀后湿法装柱，后用90％乙醇反复冲洗，直至流出液与水混合（Va：Vg＝1：5）无白色浑浊出现，再用水洗至无乙醇气味，加入3％ 盐酸浸泡3h．用水洗至中性；再用3％氢氧化钠溶液浸泡3h，用水洗至中性，备用。

1.2.2.2 静态吸附与洗脱 准确称取5.0g六种不同极性的大孔树脂（NKA-2、HPD 100、AB-8、HPD300、HPD 400）置于锥形瓶内，分别加入6mg／ml．100ml提取液后，置于恒温振荡器内，静态吸附24h后过滤。通过下式测得不同类型大孔树脂的静态饱和吸附量与吸附率。

式中：m。为提取液中多酚质量，mg：m，为饱和吸附后滤液中多酚质量，mg：m为干燥的大孔树脂质

利用乙醇作洗脱剂，将饱和吸附后的树脂置于锥形瓶内，加入60％乙醇100mL后，置于恒温振荡器中，静态洗脱24h，过滤，测定滤液中多酚的浓度，通过下式测得不同类型树脂的洗脱率与回收率。

式中：m，为提取液中多酚质量，mg；m，为饱和吸附后滤液中多酚质量，mg：m，为洗脱液中多酚质量，mg：D，为洗脱率.％：R为回收率，％。

1.2.3 吸附等温线 准确配制100ml浓度为1、2、3、4、5、6、7mg／ml．的肉苁蓉提取物溶液加入至装有5.0g树脂的锥形瓶后，分别置于25、35、45℃恒温摇床中，振荡吸附24 h．测得滤液总多酚浓度，计算吸附量，绘制吸附等温线，同时利用 Langmuir、Freundlich吸附模型，绘制相应等温吸附方程。

式中：T。为多酚饱和吸附量，mg／g：K，为Langmuir方程常数：T.为多酚吸附量，mg／g：C，为滤液多酚浓度，mg／ml；K，为Feundlich方程常数。

1.2.4 吸附动力学曲线 准确称取大孔树脂5.0g置于锥形瓶内，加入100mL质量浓度为5mg／mL的多酚提取液，于25℃振荡吸附，分别于0.5、10、2.0、3.0、5.0、7.0、10.0.12.0、16.0、20.0、24.0h取样，测定总 多酚浓度，以吸附量（Γ）为纵坐标，时间（t）为横坐标，绘制静态吸附动力学曲线，分析树脂对肉苁蓉多酚的吸附动力学行为。

式中：K，为准一级速率常数，min＇；K，为准二级速率常数，mL＊mg＊min；K，为颗粒内扩散速率常数，mg＊min-5·min-＇。

1.2.5 大孔树脂动态吸附

1.2.5.1 上样液浓度影响 分别准确量取等体积的多酚提取液2、4、6、8.10mg／mL，控制流速2mL／min，上样至预处理后的树脂内（树脂质量：5.0g：径高比：1：12），收集柱后流出液，测得不同流出液中多酚浓度，计算各自吸附率。

1.2.5.2 吸附流速影响 准确量取等体积5份

1.2.5.1确定的最佳浓度多酚提取液，分别控制流速

1、2、3、4.5mL／min，上样至预处理后的树脂内（树脂质量：5.0g：径高比：1：12），收集柱后流出液，测得不同流出液中多酚浓度，计算各自吸附率。

1.2.5.3 树脂吸附泄露曲线 准确量取1.2.5.1确定的最佳浓度多酚提取液，以1.2.5.2实验中确定的最佳流速上样至预处理后的树脂内（树脂质量：5.0g：径高比：1：12），收集柱后流出液，每管体积5mL，直