至到达饱和吸附，测得各自吸附率，绘制树脂吸附泄

露曲线并确定最住上样液体积。

1.2.6 大孔树脂动态洗脱

1.2.6.1 乙醇浓度影响 以乙醇溶液作洗脱剂，分别选择体积分数40％、50％、60％、70％．80％的乙醇溶液，控制1ml／min洗脱流速，对1.2.5.3饱和吸附后的树脂进行洗脱，直至洗脱完全，收集洗脱液，测定多酚浓度，计算各自洗脱率。

1.2.6.2 洗脱流速影响 配制5份1.2.6.1 试验中确定的最佳浓度乙醇溶液，分别控制流速0.5、1、2、3、4．ml／min，对1.2.5.3饱和吸附后的树脂进行洗脱，直至洗脱完全，收集洗脱液，测定多酚浓度，计算各自洗脱率。

1.2.6.3 树脂洗脱曲线 精密量取1.2.6.1 实验中确定的最佳浓度乙醇溶液，以1.2.6.2实验中确定的最佳流速对1.2.5.3饱和吸附后的树脂进行洗脱，直至洗脱完全，收集洗脱液，每管体积5mL，测量每管总多酚浓度，绘制树脂洗脱曲线。

1.2.7 定量分析

1.2.7.1 标准曲线绘制 按照文献所述方法，准确称取没食子酸标准品20mg溶于水中，另加入 Folin-酚试剂和质量分数为20％的NaCO，溶液，配制成质量浓度为0.1-0.8mg／L的标准溶液，并于760nm处测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到标准曲线方程y＝1.472x-0.0527（r＝0.9961)。

1.2.7.2 多酚浓度测定 照上述步骤配制样品溶液后，于760nm波长处，测定吸光度后，根据方程计算样品中多酚浓度，另作空白试验，平行测定三次，按照下式计算样品中多酚的纯度。

纯度（％）＿CxVxD-x100       式（10）

式中m。为样品质量，mg：C为产物的多酚浓度，mg／ml；V为样品体积，mL：D为稀释倍数。

1.3 体内抗疲劳研究

1.3.1 模型建立 将50只健康雄性小鼠，随机分为五组，每组10只，空白对照组采用生理盐水灌胃，其它各组则按照小鼠体重灌药，其中阳性对照组采用0.1mg／g西洋参灌胃，低、中、高剂量组则依次灌胃0.05.0.10.0.20 mg／g多酚纯化物，每天灌胃1次，连续灌胃30d。每组小鼠灌胃1h后于恒温游泳池内开展游泳训练，5d为一训练周期，共训练4周。

1.3.2 动物游泳运动 模型建立后于鼠尾负重自身5％的重物，进行力竭性游泳运动，记录小鼠自入水开始游泳至沉没超过10s的时间，即为游泳力竭时间。

1.3.3 体内生化指标测定 小鼠游泳运动进行10min后，取出擦净，摘取眼球，抽血离心，同时分取肝与肌肉组织，采用相关试剂盒分别测得各组动物血清中乳酸、肝糖原、肌糖原含量和乳酸脱氢酶的活力。

1.4 数据处理

实验结果均采用均数±标准差表示，采用SPSS18.0方差分析，检验水准α＝0.05，当P＜0.05表示差

异显著．P＜0.01表示差异极显著。

2 结果与讨论

2.1 树脂型号确定

表1为不同型号大孔树脂对提取物中多酚的静态吸附与洗脱性能比较，从表1中可知，不同树脂的吸附能力不同，其中HPD-400大孔树脂对肉苁蓉多酚的吸附率最高，达到88.0％，其次为NKA-2，吸附率为77.0％，而采用60％乙醇静态洗脱时，HPD-400大孔树脂的洗脱率最大，达到91.2％，表明HPD-400大孔树脂对肉苁蓉多酚的吸附与解吸性能较好，这可能源于同其它四类树脂相较，HPD-400树脂极性适中，与多酚的相互作用较好，因此确定HPD-400大孔树脂作为该纯化研究的吸附树脂。

表1 不同树脂的静态吸附与洗脱性能比较

Table 1 Compare with static adsorption

and desoption perfomance of different resins

2.2 树脂吸附等温线

HPD-400大孔树脂对肉苁蓉多酚的吸附等温，如图1所示，不同温度下，随着上样液多酚浓度的增大，树脂吸附量不断增加，分别对不同温度的吸附曲线进行拟合，结果见表2所示。从表2可知，不同温度下 HPD-400大孔树脂对肉苁蓉多酚的等温吸附过程与Langnuir 吸附等温模型相近，方程相关系数r均大于0.99，同时随着温度升高，吸附量逐渐减少，表明该吸附过程为放热过程。

图1 不同温度的吸附等温曲线

Figl The aborption cuve in different temperatues

2.3 树脂吸附动力学曲线

HPD-400 大孔树脂对肉苁蓉多酚的吸附动力学曲线，如图2所示。在0-2h时，树脂对多酚的吸附量较大，逐渐缓慢至12h后达到平衡，表明HPD-400大孔树脂对肉苁蓉多酚的吸附较快。利用相关动力学方程模型对上述吸附过程进行拟合，见表3所示，该吸附过程与准二级动力学过程更为接近，同时从Kannan拟合方程结果可知，该吸附过程分为三

表2 不同温度的吸附等温线拟合方程

Table 2 Fiting equations of adsorption

isotherms in different temperatures

个阶段，在0-4h为薄膜扩散过程，在4-12h为粒内扩散过程，T，对均具有良好的线性关系，12h后树脂对多酚的吸附与脱附达到平衡

Table 3 The fiting equations of adsorption dynamies

2.4 动态吸附条件选择

2.4.1 上样液浓度选择 若上样液多酚浓度过高，树脂易过早饱和，造成树脂吸附率下降，而上样液多酚浓度过低，则影响实验效率。不同上样液浓度对吸附率的影响，见图3所示，当多酚浓度为2～6mg／ml时，随着上样液多酚浓度的增大，HPD-400大孔树脂对多酚的吸附率处于较高水平，而多酚浓度大于6mg／mL时，吸附率开始逐渐下降，这归因于样品溶液中部分多酚的泄露，因此确定上样液最佳多酚浓度为6mg／ml。

2.4.2 吸附流速选择 在动态吸附时，上样流速过快，多酚与树脂接触不充分，可能造成过早泄漏，但流速过慢，又导致纯化耗时过长，且对后续树脂再生产生不良影响。不同上样流速对吸附率的影响，见图4所示，当上样流速在1-2mL／min时，HPD-400大孔树脂对多酚的吸附率无明显影响，而随着流速增大，吸附率呈下降趋势，因此选择2mL／min 作为最佳上样流速。

2.4.3 动态吸附泄漏曲线 当流出液的多酚浓度为

上样液浓度的10％，称为树脂吸附泄漏点，达到上样液浓度的100％时称为树脂饱和吸附点叫。肉苁蓉多酚在上样过程时不断被树脂吸附与脱附，当吸附速率等于脱附速率时，出现泄漏现象，见图5所示，当上样液体积约为60ml时，流出液中总多酚浓度急剧上升，且超出上样液浓度10％，达到泄漏点，上样液体积约为140ml时，达到饱和吸附点，因此确定HPD-400大孔树脂纯化肉苁蓉多酚化合物的最大上样体积为60ml

2.5 洗脱条件选择

2.5.1 乙醇浓度选择 不同浓度的乙醇溶液对肉苁蓉多酚的洗脱效果，见图6所示。随着洗脱液浓度增大，洗脱率逐渐增大，至60％开始下降。这可能因为低浓度乙醇破坏多酚与树脂形成的氢键能力较弱，而过高浓度乙醇的极性与多酚化合物相差较大，不利于洗脱，因此确定采用60％乙醇溶液作为最佳