于迎春，赵阳，梁素萍，郑景辉＊

（广西中医药大学附属瑞康医院，广西南宁530001）

摘要：目的 使用网络药理学方法对山茱英-肉苁蓉治疗帕金森病的作用机制进行研究。方法 依据中药系统药理学技术平台（TCMSP）数据库以化合物的口服药物生物利用度（OB）、类药性（DL）和血脑屏障通透性（BBB）为标准筛选山茱萸-肉苁蓉的化合物，运用BATMAN-TCM（中药分子机制生物信息学分析工具）对筛选出的化合物可能作用的靶点进行预测，通过GeneCards数据库检索与帕金森病相关的基因。借助 Cytoscape 3.5.1软件构建药物-化合物。靶点网络图，运用STRING平台构建相关靶点蛋白相互作用网络图，通过生物学信息注释数据库（DAVID）对靶点基因本体（GO）进行富集分析及基因组百科全书（KEGG）进行通路分析。结果 从山茱英-肉苁蓉中共筛选得到21种有效成分，与帕金森病相关的靶点有19个，主要涉及多巴胺能神经元功能、乙酰胆碱系统和炎症等方面的调节作用。主要的KEGG通路为多巴胺能神经突触、神经活性配体-受体相互作用、cAMP信号通路、缝隙连接、5-羟色胺能突触、信号通路、帕金森疾病等。结论 山茱英-肉苁蓉药对治疗帕金森病的可能机制是调控多巴胺能神经突触、神经活性配体-受体相互作用、cAMP信号通路、缝隙连接、5-羟色胺能突触、信号通路等。

关键词：山茱萸-肉苁蓉；帕金森病；网络药理学；机制

中图分类号：R285.5      文献标志码：B     文章编号：1001-1528（2020）11-3034-07

doi:10.3969/j.issn.1001-1528.2020.11.041

帕金森病（Parkinson＇sdisease，PD）是一种进行性、多灶性神经退行性疾病，约1％的60岁以上人群受其影响，其发病率随年龄增长逐渐升高。目前，PD的病因未明，其具体发病机制尚不明确，主要认为与神经炎症、氧化应激、基因突变、免疫学异常、细胞凋亡、线粒体损伤等有关1。临床上PD最常用的治疗方案是多巴胺替代疗法，但只控制临床运动症状，不能阻止疾病的进展，且长期的药物治疗可能导致严重的、不可逆的运动并发症。其他治疗方法主要包括外科治疗，如毁损手术、脑深部刺激等，干细胞疗法5），中医针灸、运动疗法、音乐疗法等辅助疗法治疗PD，但均不可以彻底治愈。

山茱萸-肉苁蓉药对来源于地黄饮子，出自于《黄帝内经·素问·宣明论方》，为补肾化痰名方，具有滋阴、补阳、开窍化痰之功效，山茱萸、肉苁蓉阴阳并补，共为君药，两药相使为用，发挥功效，其中山茱英具有补益肝肾、收涩固脱等功效，现代药理学研究表明其具有明显的抗氧化、抗炎杀菌、降血糖等功效。肉苁蓉具有补肾阳、益精血、润肠通便之功效，现代药理学研究表明肉苁蓉具有神经细胞保护、抗氧化、抗衰老、调节免疫等作用。目前山茱萸-肉苁蓉药对在临床治疗帕金森病中广泛应用，但其治疗帕金森的确切机制尚不明确，本研究采用网络药理学的方法，通过相关数据库对山茱萸-肉苁蓉药对所包含的有效成分及作用靶点进行筛选，并将其靶点与帕金森疾病靶点进行匹配，筛选出山茱英-肉苁蓉治疗PD相关的关键作用靶点，并进一步分析其治疗PD的物质基础和作用机制。

1 材料与方法

1.1 山莱萸与肉苁蓉药物成分信息获取及整理 使用中药系统药理学数据库和分析平台（traditional Chinse medicinesystems pharmacology database and analysis platform,TCMSP) 收集中药山茱萸、肉苁蓉的化合物，并以口服生物利用度（oral binavailability，OB）≥30％、类药性（drug likenem， DL）≥0.18，因有研究发现帕金森病患者血脑屏障受损），故设定血脑屏障通透性（BBB）≥-0.85，为限定条件对所收集到的化合物进行筛选，将最终筛选出的化合物建立有效化合物数据库。

1.2 山茉萸-肉苁蓉药对作用靶点的预测 运用中药分子机制生物信息学分析工具（a bioinformatios analysis tool formolecular mechanism of traditional Chinese medicine, BATMAN-TCM)(http://bionet.ncpsb.ong/batman-tcm/in-dex.php／Home／Index／index）对运用TCMSP筛选出的山茱英-肉苁蓉药有效化合物作用靶点进行预测。

1.3 有关帕金森病相关基因捧选 将“Parkinson＇。disease”作为检索词，通过GeneCands数据库（https：／／www.genecank.org／）检索帕金森病相关靶点。GeneCank数据库通过Gifts算法，能够准确计算靶点与疾病的相关度，并按照相关度进行评分排序。本研究选取其中最低分超过20分的前237位靶点进行研究，其中最高分 146.47分，并摘录相应的靶点的标准基因名。

1.4 山茉萸-肉苁蓉对帕金森病作用靶点的预测及PPI网络构建 首先将预测所得的山茱萸-肉苁蓉药对作用靶点与筛选出的帕金森相关发病靶点导入 VENNY21（http：／／bioinfogp．enh esie.es／toots／venny／index.hml），得出两者共同靶点，即可能作用于帕金森病的靶点。后将所得共同靶点与其化合物相对应，使用Cytoscape 3.6.1软件做出化合物-靶点图。并将山茱英-肉苁蓉药对作用于帕金森病的靶点上传至STRING 10.5数据库中（https：／／string-dh.org），选择研究物种为“Homo-sapiens”（智人），设定靶点间最低联系分数为0.4分，隐藏无相互关联的靶点，获得靶点联系网络图，最后将该图导入Cy-toscape 3.6.1 软件中构建PPI网络图。

1.5 山茉萸-肉苁蓉对帕金森病作用靶点的CO分析和KEGG分析 将山茱萸-肉苁蓉对帕金森病作用靶点导入DAVID Bioinformatics Resources 6.8数据库（https：／／david． nciferf.gow／summary.jp），选择其中分子功能（moleeular function），生物过程（biologica proces）和细胞成分（celIular component）3项对山茱英-肉苁蓉作用于帕金森病的靶点进行GO富集分析，筛选具有显著差异的生物过程及可靠的靶点通路，并且使用GraphPad Prism 7软件将 CO富集分析满足P＜0.05的结果做成可视化条形图。选择KECG进行靶点基因通路注释分析，将得到的结果且满足P＜0.05作为重要通路用Omicshare（http：／／www.omicsham. com／）制作成可视化气泡图。

2 结果

2.1 山莱萸-肉苁蓉活性成分的筛选通过TCMSP数据库检索山茱英及肉苁蓉的所有化合物（截止时间至2018年12月），并按照口服生物利用度（oal Noavailability，OB）30％、类药性（drug likeness，DL）≥0.18和血脑屏障通透性（BBB）≥-0.85作为筛选条件，筛选获得山茱萸的潜在活性成分16种，肉苁蓉潜在活性成分6种，见表1。

2.2 山莱萸-肉苁蓉化合物作用靶点的预测 将山茱萸-肉苁蓉化合物的Pubehem Cidl代码上传至BATMAN-TCM数据库平台，并设置相似性模型阀值为“Score cutoff＝20”，得到各化合物所对应的潜在靶点，并按照返回靶点的得分顺序排列，选各化合物取前20个靶点，不足20全部纳人，并去除重复靶点后，最终得到山茱英化合物作用靶点164个，肉苁蓉化合物作用靶点94个。

2.3 柏金森病发病靶点师选 通过GeneCards 数据库共检索“Parkinson＇sdisease”，共获得5597个可能引起帕金森病相关的靶点，其中Synuclein Alpha类靶点相关度最高（146.47分），本研究选取其中相关度得分≥20分的靶点，共筛选获得237个相关靶点。

2.4 山茉萸-肉苁蓉作用于帕金森病靶点预测 将将预测的山茱萸-肉苁蓉化合物靶点及筛选得出帕金森病相关基因靶点，全部以基因名格式导人VENVY2.1软件中，取两者的交集，得出19个化合物与疾病共同靶点，19个具体靶点信息见表2，得出的韦恩图如图1所示。

2.5 化合物-靶点网络图的构建 将山茱萸、肉苁蓉药对

表1 山茱萸-肉苁蓉药对化合物

MOL008871  mankine                    37.5      0.69         -0.10

表2 山茱萸-肉苁蓉治疗帕金森病的关键靶点

表2 山茱萸-肉苁蓉治疗帕金森病的关键靶点
编号	基因名	靶点	相关度得分
1	SLC6A3	Solate camier fammly 6mmmber3（多巴胺转运体）	81.34
2	DRD2	上一篇：生长年限和采收季节对人工接种 肉苁蓉药材有效成分的影响 下一篇：山茱萸-肉苁蓉药对治疗帕金森的网络药理学研究（二） CONTACT US 联系方式 公司：win德赢官方 地址：新疆和田洛浦县杭桂路232号 公司网址：www.www.wagawa.com 厂家服务热线：0903-6682528 全国服务热线：400-966-8288 在线商城扫一扫购买 SHORTUCT MENU 快捷导航 网站首页 新闻中心 企业荣誉 公司产品 vwin.com 商城 德赢vwinac米兰伙伴 copyright © 2018-2019 www.www.wagawa.com win德赢官方 All rights reserved    新ICP备15002650号-1     网站技术支持：新疆百疆图网络服务有限公司 map