摘要：目的　研究肉苁蓉苯乙醇总苷（ｐｈＧｓ）对庆大霉素诱导大鼠急性肾损伤的保护作用。方法　将５４只雄性ＳＤ大鼠随机分为１０ｄ、１５ｄ空白对照组（生理盐水１０ｍＬ／ｋｇ体质量），１０ｄ、１５ｄ模型组（生理盐水１０ｍＬ／ｋｇ体质量），１０ｄ、１５ｄｐｈＧｓ高剂量组（ｐｈＧｓ　５００ｍｇ／ｋｇ体质量），１０ｄ、１５ｄｐｈＧｓ低剂量组（ｐｈＧｓ　２５０ｍｇ／ｋｇ体质量）以及２１ｄ模拟临床治疗组（生理盐水１０ｍＬ／ｋｇ体质量），每组６只，除１０ｄ、１５ｄ空白对照组外其他各组大鼠连续１０ｄ腹腔注射庆大霉素（７５ｍｇ／ｋｇ体质量）建立急性肾损伤模型。各组实验结束后留取大鼠２４ｈ尿液并记录尿量，腹主动脉取血，取双侧肾脏并计算肾脏指数。采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清中肌酐（Ｓｃｒ）和尿素氮（ＢＵＮ）含量，采用生化试剂盒检测各组大鼠肾脏组织中丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）表达量。结果　与空白对照组比较，１０ｄ、１５ｄ模型组大鼠血清Ｓｃｒ、ＢＵＮ、２４ｈ尿量及肾脏组织中ＭＤＡ 表达量均升高，肾脏组织中ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＳＨ－ＰＸ酶的活性均降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）。与模型组比较，１０ｄ、１５ｄｐｈＧｓ高、低剂量组大鼠血清Ｓｃｒ、ＢＵＮ、２４ｈ尿量及肾脏组织中ＭＤＡ表达量均降低，肾脏组织中ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＳＨ－ＰＸ酶的活性均升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）。结论　肉苁蓉苯乙醇总苷对庆大霉素诱导的大鼠急性肾损伤具有一定保护作用。

关键词：肉苁蓉；苯乙醇总苷；庆大霉素；急性肾损伤

急性肾损伤（ａｃｕｔｅ　ｋｉｄｎｅｙ　ｉｎｊｕｒｙ，ＡＫＩ）是各种原因引起的肾脏滤过功能突然快速下降或丧失的临床综合征［１］。目前ＡＫＩ的发病率呈逐年上升趋势，其病因多样并能够导致多种并发症，临床治疗的干预手段十分有限［２，３］。研究发现连续接受氨基糖苷类抗生素治疗是ＡＫＩ的独立危险因素［４］，其诱发机制与药物介导的自由基产生、磷脂沉积、肾血流减少及局部炎症有关［５］。临床多采用治疗药物监测技术手段治疗氨基糖苷类抗生素诱导的急性肾功能损伤，但无法从根源上改善或逆转由该类抗生素所产生的肾脏损伤风险［６］。早期干预氨基糖苷类抗生素的肾毒性是目前氨基糖苷类抗生素合理应用研究中的热点。中药肉苁蓉（Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｓ　Ｈｅｒｂａ）为列当科Ｏｒｏｂａｎｃｈａｃｅａｅ肉苁蓉属Ｃｉｓｔａｎｃｈｅｓ植物干燥带鳞叶的肉质茎，具有补肾阳、益精血等功效［７］，其性温，味甘，归肾经。苯乙醇总苷是肉苁蓉中主要化学成分，能够增加血清超氧化物歧化酶的活性，抑制丙二醛表达，增强机体对氧自由基的清除能力，减少体内自由基累积，发挥保护机体免受过氧化损伤功效［８］。本研究采用庆大霉素构建大鼠急性肾损伤模型，探究肉苁蓉苯乙醇总苷对庆大霉素诱导急性肾损伤的防治作用，现报道如下。

１　材料与方法

１．１　实验动物　ＳＤ大鼠５４只，雄性，体质量（２００±２０）ｇ，购于新疆医科大学动物实验中心，动物生产许可证号：ＳＣＸＫ（新）２０１６－０００３，所有动物饲养于新疆医科大学动物实验中心ＳＰＦ屏障环境，使用许可证号：ＳＹＸＫ（新）２０１６－０００２，环境温度２４～２６℃，恒温恒湿，相对湿度在４０％～７０％，大鼠自由进食和饮水。

１．２　试药　肉苁蓉苯乙醇总苷（本课题组从德赢vwin登录 中富集纯化而得，苯乙醇总苷含量达８９．５％，松果菊苷含量大于４０％，毛蕊花糖苷含量大于１６．０％），硫酸庆大霉素注射液（河南辅仁怀庆堂制药有限公司，批号１６１２２４１１），丙二醛（ＭＤＡ）检测试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号ＶＡＡＡＫ６Ｓ２８６），超氧化岐化酶（ＳＯＤ）检测试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号ＷＳＨ２７ＳＳ９ＧＢ），过氧化氢酶（ＣＡＴ）检测试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号ＦＧＳ３Ｊ６６Ｄ２Ｋ），谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）检测试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批

号ＤＫ８Ａ６２２ＸＺＰ），ＢＣＡ 蛋白定量试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号２０１９０６２２）。

１．３　实验仪器　ＴＤ５０００２Ａ型电子天平（余姚市金诺天平仪器有限公司），Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ全波长酶标仪（美国Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ公司），ＢＳ－３２０型全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司），Ｂｉｏｆｕｇｅｐｒｉｍｏ台式冷冻离心机（美国Ｔｈｅｒｍｏ　Ｆｉｓｈｅｒ公司）。

１．４　造模、分组及给药方法　５４只雄性ＳＤ大鼠适应性喂养１周后，随机分为１０ｄ、１５ｄ空白对照组，１０ｄ、１５ｄ模型组，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高剂量组，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷低剂量组、以及２１ｄ模拟临床治疗组，每组６只。除１０ｄ、１５ｄ空白对照组外其他各组大鼠连续１０ｄ腹腔注射庆大霉素（７５ｍｇ／ｋｇ体质量）建立急性肾损伤模型。给药方法：（１）１０ｄ、１５ｄ空白对照组大鼠分别给予生理盐水（１０ｍＬ／ｋｇ体质量）腹腔注射与灌胃至１０ｄ与１５ｄ；（２）１０ｄ、１５ｄ模型组大鼠造模同时分别给予生理盐水（１０ｍＬ／ｋｇ体质量）灌胃至１０ｄ与１５ｄ；（３）１０ｄ、１５ｄ高剂量组大鼠每日造模同时分别给予肉苁蓉苯乙醇总苷（５００ｍｇ／ｋｇ体质量）灌胃至１０ｄ与１５ｄ；（４）１０ｄ、１５ｄ低剂量组大鼠每日造模同时分别给予肉苁蓉苯乙醇总苷（２５０ｍｇ／ｋｇ体质量）灌胃至１０ｄ与１５ｄ；（５）２１ｄ模拟临床组大鼠造模同时给予生理盐水（１０ｍＬ／ｋｇ体质量）灌胃至２１ｄ。大鼠每周称重，根据体质量调整药物用量。

１．５　标本采集　各组大鼠第１０ｄ、１５ｄ和２１ｄ收集２４ｈ尿液（动物于前一天放入代谢笼中，每个代谢笼放１只动物，２４ｈ后取出），４℃，３　０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，收集上清液－２０℃冻存，备用。实验结束后各组大鼠禁食不禁水，腹腔注射１０％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，室温静置１ｈ后４℃，３　５００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上层淡黄色澄清液体分装，－２０℃冻存，备用。将各组大鼠麻醉，充分暴露腹腔，用止血钳固定双侧肾组织远心端和近心端的动静脉，剪开肾静脉后经腹主动脉注入４℃等渗生理盐水，灌注至肾脏颜色转为苍白，快速取出双侧肾置于滤纸上吸干水分后称重，计算脏器指数。取大鼠新鲜右肾皮质部分０．４ｇ，按１∶９加入预冷后的生理盐水，低温环境下制成１０％肾组织匀浆，冻存，备用。脏器指数计算公式如下：肾脏指数＝双侧肾质量×１０３／大鼠体质量。

１．６　大鼠血清肌酐和尿素氮水平的检测　取待测血清样本置于全自动生化分析仪测定，按试剂盒说明操作测定大鼠血清中肌酐和尿素氮含量。

１．７　大鼠肾脏组织ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＳＨ－ＰＸ、ＭＤＡ的检测　取大鼠肾脏匀浆液室温放置融化，４℃，３　０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，收集上清液，采用ＢＣＡ试剂盒检测各组大鼠肾脏组织蛋白浓度。按照试剂盒说明操作测定肾组织中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ）活性和丙二醛（ＭＤＡ）含量。

１．８　统计学处理　采用ＳＰＳＳ　２１．０统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（－ｘ ±ｓ）表示，两组组间比较采用ｔ检验，检验水准α＝０．０５。

２　结果

２．１　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠体质量、肾指数和２４ｈ尿量的影响　造模前各组大鼠体质量差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５）。造模后，与空白对照组比较，各模型组大鼠体质量降低，肾指数和２４ｈ尿量升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高、低剂量组大鼠体质量升高，肾指数和２４ｈ尿量降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）；模拟临床组大鼠体质量升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５），肾指数和２４ｈ尿量差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表１。

２．２　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠血清肌酐含量的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠血清肌酐含量升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高、低剂量组大鼠血清肌酐含量降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）；模拟临床组大鼠血清肌酐含量差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表２。

２．３　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠血清尿素氮含量的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠血清尿素氮含量升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高、低剂

量组大鼠血清尿素氮含量均降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；模拟临床组大鼠血清尿素氮含量差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表３。

２．４　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠肾组织中ＳＯＤ活力的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠肾组织中ＳＯＤ活力降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组相比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高、低剂量组大鼠肾组织中ＳＯＤ活力升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；模拟临床组大鼠肾组织中ＳＯＤ活力升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１），见表４。

２．５　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠肾组织中ＣＡＴ活力的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠肾组织中ＣＡＴ活力降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组相比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷高、低剂量组大鼠肾组织中ＣＡＴ活力升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；模拟临床组大鼠肾组织中ＣＡＴ活力无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表５。

２．６　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠肾组织中ＧＳＨＰＸ活力的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠肾组织中ＧＳＨ－ＰＸ活力降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组相比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯

乙醇总苷高、低剂量组大鼠肾组织中ＧＳＨ－ＰＸ活力升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０５）；模拟临床组大鼠肾组织中ＧＳＨ－ＰＸ 活力无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表６。

２．７　肉苁蓉苯乙醇总苷对各组大鼠肾组织中ＭＤＡ含量的影响　与空白对照组比较，各模型组大鼠肾组织中ＭＤＡ含量升高，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）；与模型组相比较，１０ｄ、１５ｄ肉苁蓉苯乙醇总苷

高、低剂量组大鼠肾组织中ＭＤＡ含量降低，差异有统计学意义（Ｐ ＜０．０１）。模拟临床组大鼠肾组织中ＭＤＡ含量差异无统计学意义（Ｐ ＞０．０５），见表７。

３　讨论

氨基糖苷类抗生素常见严重不良反应是肾毒性［９］。该类药物极易以原型药物通过肾小球滤过，部分药物分泌入尿液，而绝大部分药物选择性蓄积在肾皮质，使得在该部位的浓度高于血清中药物浓度几倍［１０］，这种药物蓄积不可避免的造成细胞损伤及肾功能下降。长期以来，临床上对氨基糖苷类药物引起的ＡＫＩ始终沿袭停药、常规补液的对症支持治疗原则，静待肾脏病变自身的转归，目前尚无其他药物可以减轻氨基糖苷类药物对肾组织的损伤。因此本研究设立了２１ｄ模拟临床治疗组，尽可能模拟临床常规治疗及机体康复过程，以便进一步客观考察肉苁蓉苯乙醇总苷的治疗效果。在临床治疗中，Ｓｃｒ和ＢＵＮ常作为评价肾功能的指标，Ｓｃｒ和ＢＵＮ水平越高则反映肾功能损伤越严重［１１］。本研究通过大鼠连续１０ｄ腹腔注射庆大霉素７５ｍｇ／ｋｇ建立ＡＫＩ模型，与空白对照组相比，模型组大鼠Ｓｃｒ和ＢＵＮ水平升高，提示造模成功。经过肉苁蓉苯乙醇总苷干预１０ｄ、１５ｄ后，各给药组大鼠Ｓｃｒ和ＢＵＮ下降，表明肉苁蓉苯乙醇总苷对庆大霉素所致ＡＫＩ具有良好的改善作用。研究发现，活性氧簇（ＲＯＳ）的增加在庆大霉素引起的肾小管损伤的病理过程中扮演着重要的角色［１２］。ＭＤＡ是反应机体内ＲＯＳ水平的主要物质之一［１３－１４］，生物体内抵抗ＲＯＳ的抗氧化剂（ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ）防御系统包括主要包括ＳＯＤ、ＣＡＴ、ＧＳＨＰＸ等。苯乙醇总苷作为肉苁蓉主要有效成分，能够在动物体内发挥显著的抗氧化活性［１５］。肉苁蓉苯乙醇总苷干预后，给药组大鼠肾脏组织ＭＤＡ 含量则明显降低，ＳＯＤ、ＣＡＴ和ＧＳＨ－ＰＸ活性明显升高，提示肉苁蓉苯乙醇总苷能够改善肾脏氧化应激损伤状况并减轻肾脏损伤。综上所述，肉苁蓉苯乙醇总苷对庆大霉素诱导的急性肾损伤具有保护作用，通过抑制自由基产生和激活自由基清除酶发挥抗氧化作用，改善机体氧化应激状态，增强机体抗氧化能力，减轻肾脏损伤。

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